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中級會(huì)員 | 第17年

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瓊脂糖凝膠電泳的制備過程

時(shí)間:2023/8/29閱讀:995
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瓊脂糖是實(shí)驗(yàn)室常用的試劑之一,,但是瓊脂糖凝膠電泳的制備過程也不簡單,,接下來就為大家詳細(xì)介紹一下制備過程。
一,、用稱量紙片電子天平取0.3g的瓊脂粉,;
二、配30ML的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶里,;
三,、倒入瓊脂粉搖勻,并轉(zhuǎn)到微波爐中加熱溶解,;
四,、用手套取出到?jīng)鏊陨粤罌鲋翜責(zé)岷螅s60℃),加入核酸酶(Eb替代物)2ul,;要邊加邊搖勻,,使之充分搖勻;
五,、取電泳槽內(nèi)的有機(jī)玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干,,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好,形成模子,。
將內(nèi)槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上,,使膠液緩慢展開,直到整個(gè)玻璃板表面形成均勻膠層,。
室溫下靜置直至凝膠凝固,垂直輕拔梳子,,取下膠帶,將凝膠及內(nèi)槽放入電泳槽中,。
注意:制備過程中請戴好手套,;梳齒處不可存在氣泡,液面應(yīng)保持平整無波紋,。

開始跑膠
一,、膠凝后取膠放到電泳槽中,倒入電泳液至浸過凝膠,。
二,、從冰箱中取出MARK和loading buffer,,加入6ULloading buffer到樣品中混勻;然后用加樣槍分別加到凝膠的大孔中(要緩慢加,,不要穿破凝膠,,最后槍不要打盡以至于有空氣使樣品吹打出來);MARK加到小孔中的任一孔(記住位置),。
三,、蓋上電泳槽,加樣后的凝膠板立即通電進(jìn)行電泳,,電壓60-100V,,樣品由負(fù)極(黑色)向正極(紅色)方向移動(dòng),電壓升高,,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低,,當(dāng)溴酚藍(lán)移動(dòng)到距離膠板下沿約1cm處時(shí),停止電泳,。
四,、使用凝膠成像儀拍照,觀察條帶(mark或樣品是否有條帶顯示),。

觀察方法
電泳時(shí)間依據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求而定,,在電泳中途可以使用紫外燈直接觀察,也可以根據(jù)指示劑確定條帶的遷移位置,,各條區(qū)分開后電泳結(jié)束,,取出凝膠直接檢測拍照。
拿到膠體條帶圖譜后,,找到marker,,根據(jù)marker就可以確定目標(biāo)條帶了。

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