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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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免疫熒光染色原理及步驟

時(shí)間：2023/8/18閱讀：897
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免疫熒光又稱免疫熒光抗體,。免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理是將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上,，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng),。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高,，非特異性熒光染色少,，相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位,。

 

  下面詳細(xì)介紹免疫熒光染色步驟：

  1. 滴加 0.01mol/L,，pH7.4 的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去,，使標(biāo)本保持一定濕度,。

  2. 滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其覆蓋標(biāo)本,，置于有蓋搪瓷盒內(nèi),，保溫一定時(shí)間(參考：30min)。

  3. 取出玻片,，置玻片架上,，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 沖洗后,，再按順序過(guò) 0.01mol/L,，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min,，不時(shí)振蕩,。

  4. 取出玻片，用濾紙吸去多余水分,，但不使標(biāo)本干燥,，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋,。

  5. 立即用熒光顯微鏡觀察,。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度，一般可用“+"表示：(-)無(wú)熒光,；(±)極弱的可疑熒光,；(+)熒光較弱，但清楚可見(jiàn),；(++)熒光明亮,；(+++--++++)熒光閃亮。待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)“++"以上,，而各種對(duì)照顯示為(±)或(-),，即可判定為陽(yáng)性。


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