1）抗原熱修復 可根據(jù)實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復,、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復,。抗原熱修復可選用各種緩沖液,，如TBS,、PBS、重金屬鹽溶液等,，但實驗證明,，以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）效果。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液（粉劑）配制,，取該粉劑一包溶于1000ml的蒸餾水中,，混勻，其pH值在6.0 ± 0.1,，如因蒸餾水本身造成的pH值偏差,，請自行調整。
（1）高壓熱修復 切片脫蠟至水,。將1500ml~3000ml的0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0,，工作液）或0.001M EDTA（pH8.0）注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上，放入鍋內,，使切片位于液面以下,，蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5~6分鐘后）,，計時1~2分鐘,，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后,，取下氣閥,，打開鍋蓋，取出切片,，蒸餾水洗后,，PBS洗2分鐘×3，下接免疫組化染色步驟,。
 
（2）煮沸熱修復 切片脫蠟至水后,，放入盛有0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0，工作液）的容器中,，并將此容器置于盛有一定數(shù)量自來水的大器皿中,，電爐上加熱煮沸，從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鐘,，然后端離電爐,，室溫冷卻20~30分鐘，蒸餾水沖洗,，PBS洗,，
 
（3）微波熱修復。切片脫蠟至水后,，3％H2O2處理10分鐘,，蒸餾水洗2分鐘×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中,，置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間并持續(xù)10~15分鐘（注意：無論是使用醫(yī)用或家用微波爐,，請根據(jù)具體機型酌情設置條件，務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求）,。取出容器,，室溫冷卻10~20分鐘（注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型）,。PBS洗,，下接免疫組化染色步驟。適用的抗原有：AR,，Bax,，bcl-2，C-fos，X-jun,，C-kit,，C-myc，E-cadherin,，Chromogranin A,，Cyclin,，ER,，Heat shock protein，HPV,，Ki-67,，MDMZ，p53,，p34,，p16，p15,，P-glycoprotein,，PKC，PR,，PCNA,，ras，Rb,，TopoismeraseⅡ等,。
 
2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃,，切片也預熱至37℃,，消化時間約為5~30分鐘（胰酶的zui終濃度可以根據(jù)使用者的要求進行調整，濃度范圍可以從0.05%至0.25%）,； 胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘,。皂素（Saponin）：一般使用濃度為2~10mg/ml的saponin溶液，消化時間為室溫孵育30分鐘,。 適用于被固定遮避的抗原,，其中有：Collagen，Complement,，Cytokeratin,，C-erB-2，GFAP,，LCA,，LN等。