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Trizol法提取總RNA的流程及原理

時(shí)間：2022/10/26閱讀：1205
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提取原理：
Trizol試劑的主要成分是苯/酚,。苯/酚的主要作用是對細(xì)胞進(jìn)行裂解,，從而使細(xì)胞當(dāng)中的蛋白質(zhì)以及核酸物質(zhì)解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質(zhì)變性,，但它不能抑制RNA酶的活性,，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍,、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（即RNA酶）,。

Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中,，Trizol能保持RNA的完整性,。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機(jī)層,。而RNA存在于水樣層中,。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原,。在除去水樣層之后,，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白,。

Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細(xì)胞：5×106）,，也可用于大量樣品（組織≥1g或細(xì)胞≥107）,，對動(dòng)物、植物,、細(xì)菌,、血液提取都適用，可同時(shí)處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速,，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染,，可用于Northernblot、RT-PCR,、RNase保護(hù)分析等,。

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