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在描述產(chǎn)品區(qū)別之前,先簡單描述下第3代間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基,。
第3代間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基是怎么開發(fā)出來的,?
研發(fā)人員根據(jù)近幾十年來,中國及國外的科研人員在間充質(zhì)干細胞研究方面取得的一些成果,,比如什么樣的物質(zhì)可以很好的促進干細胞生長,,什么樣的物質(zhì)可以抑制間充質(zhì)干細胞的分化,什么樣的物質(zhì)有更好的貼壁效果等等,。
在此基礎(chǔ)之上,,開發(fā)出一個初步的間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基配方。
然后,,構(gòu)建相應(yīng)數(shù)學(xué)模型,,結(jié)合大量的實驗,確定各種組分組合的比例,。
后,,通過應(yīng)用于不同來源的人體組織(臍帶或脂肪),提取及培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞,,微調(diào)產(chǎn)品配方,,使培養(yǎng)基能夠更為廣泛的適用于人體不同來源的組織中間充質(zhì)干細胞的提取及培養(yǎng)。
一句話,是根據(jù)人們對干細胞的認識,,專門開發(fā)出來的針對間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)產(chǎn)品,。
血清培養(yǎng)基是什么情況?
一般應(yīng)用 DMEM/F12,,或 a-MEM,,加上胎牛血清。
一句話,,是天然形成的產(chǎn)品,,無法根據(jù)干細胞的特點進行對應(yīng)調(diào)整與優(yōu)化,。
第3代無血清 MSC 培養(yǎng)基與血清 MSC 培養(yǎng)基有什么不同,?
從大的方面來講,大致有 9 個方面的不同,。
1.從使用安全性來講
無血清 MSC 培養(yǎng)基更安全,。
該培養(yǎng)基沒有添加血清,也沒有添加任何動物來源的組分,,化學(xué)成分限定,。因此,該培養(yǎng)基沒有任何動物來源組分,,在這種間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞進入人體后,,不會引起由于人體免疫排斥所經(jīng)常發(fā)生的過敏及發(fā)燒癥狀。
另外,,由于沒有任何動物來源的組分,,自然也不會有任何與此相關(guān)的致病菌或病毒等,比如瘋牛病毒等,。
2.從使用便利性來講
更便利,,需要的操作步驟更少。
使用友康間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)MSC,,可用干細胞溫和消化酶(同樣是化學(xué)成分限定,,無動物源組分)進行消化,且在消化后不需要終止消化(傳統(tǒng)做法一般用血清培養(yǎng)基或血清終止消化),,用 PBS 直接稀釋離心去除即可,。
更少的操作,意味著更少的工作量以及更低的污染概率,。
3.從干細胞產(chǎn)量來講
MSC 的產(chǎn)量(擴增倍數(shù))高于血清,。
在 MSC 培養(yǎng)基中培養(yǎng)所得的干細胞數(shù)量,不僅取決于培養(yǎng)基可以提供的營養(yǎng)組分,,而且受細胞是否分化的極大影響,。
第3代MSC 無血清培養(yǎng)基充分利用近幾年的科研成果,特別是干細胞分化與衰老機制的研究,通過組分的調(diào)整能夠可以更好的抑制細胞的分化,。
從細胞數(shù)量來講,,一般一根 20CM 的臍帶,可以得到原代細胞的數(shù)量為 1E7,。前三代的擴增倍數(shù)均在 10 倍以上,。(接種密度 8000 cells/cm2)。
而血清培養(yǎng)基,,由于其來源于動物血液,,所以既有抑制干細胞分化的組分,也有促進干細胞分化的組分,,沒有辦法人工選擇,。
比如,血清中含有葡萄糖,,再加上培養(yǎng)基里的糖,,總含量就比較高了,高濃度糖易促衰老和分化,;另外血清中一般均含有外泌體,,是細胞分泌的一種囊泡結(jié)構(gòu),里面含有調(diào)節(jié)細胞生長和分化的物質(zhì),,不同血清中這些物質(zhì)的比例不一樣,,所以也易導(dǎo)致分化;血清中含有代謝廢物,,這些物質(zhì)一般對細胞均有損害,,易導(dǎo)致衰老和分化。
另外,,目前很多用戶一般使用帶酚紅的培養(yǎng)基,,酚紅作為常見的激素成分,對干細胞的生長有著明顯的誘導(dǎo)分化的作用,。
事實上,,使用無血清 MSC 培養(yǎng)基的細胞產(chǎn)量高,是目前中國客戶大量該換為無血清培養(yǎng)基的主要原因,。而非安全性,。
4.從細胞質(zhì)量來講(形態(tài)、活性,、干性及表型)
從鏡下看,,無血清 MSC 培養(yǎng)的干細胞形態(tài)短小,呈標準立體梭形,,細胞邊緣清晰,,透亮,。這是細胞更少衰老與分化的直觀表征。
相比來說血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的 MSC 細胞,,細胞形態(tài)扁平,,體積更大,邊緣不清晰,。
血清培養(yǎng)基成分復(fù)雜,,含有很多促進分化的物質(zhì),細胞易發(fā)生自發(fā)分化,,因而細胞失去干性,。另外,在體外定向分化時,,易有培養(yǎng)基殘留,,會干擾定向分化。
但無血清培養(yǎng)基配方明確,,各物質(zhì)的量一定,,不含干擾組分,,細胞不易發(fā)生自發(fā)分化,,干性維持較好,即使有殘留,,也不會干擾定向分化,。
MSC 無血清培養(yǎng)基的表型,更為符合 MSC 細胞的定義,。
5.從使用成本來講
使用 MSC 無血清培養(yǎng)基,,成本傾向于越來越低。
無血清培養(yǎng)基,,其每一種組分都是人工合成的,。包括氨基酸、無機鹽,、重組蛋白等,。隨著技術(shù)進步與產(chǎn)能擴大,所有人工制造的組分的生產(chǎn)成本均會大幅下降,。
特別是隨著培養(yǎng)基研發(fā)企業(yè)不斷的改進產(chǎn)品,,比如通過配方優(yōu)化,不斷降低昂貴的重組蛋白的使用量,,干細胞培養(yǎng)基也在逐步向著*化學(xué)成分限定培養(yǎng)基發(fā)展(CD 培養(yǎng)基),,CD 培養(yǎng)基不含昂貴的重組蛋白,成本自然會大幅下降,。
從用戶角度講,,特別是干細胞藥物企業(yè)而言,,選擇血清培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基就是核心生產(chǎn)工藝的選擇。一旦選擇,,以后極難更改,。所以他們更傾向于選擇以后成本會越來越低的無血清培養(yǎng)基。
6.從干細胞藥物申報角度來講
由于無血清培養(yǎng)基有著明確的產(chǎn)品配方,,因此,,監(jiān)管機構(gòu)要求的關(guān)于細胞殘留培養(yǎng)基組分的安全性驗證的工作非常容易完成。
由于血清培養(yǎng)基,,血清中已知組分有 150 多種,,還有多種未知組分,細胞制品中的培養(yǎng)基殘留安全性驗證工作,,極難完成,,如果不說不可能的話。
7.從控制干細胞分泌因子角度來說
無血清培養(yǎng)基由于全組分都是人工添加的,,因此,,可以很方便的通過調(diào)節(jié)一些組分,來調(diào)節(jié)干細胞分泌的蛋白的含量,。比如干細胞分泌的 PEG2,,MSC 無血清培養(yǎng)基可以極為方便的通過調(diào)整不同組分的對比,大幅提高 PEG2 的表達,。當然,,其他涉及干細胞制成品的分泌的細胞因子的表達量均可通過 MSC 無血清培養(yǎng)基配方的調(diào)整得已實現(xiàn)。
8.從細胞衰老角度來說
無血清培養(yǎng)基當然不會添加會加速細胞衰老的物質(zhì),。
而血清培養(yǎng)基中的血清組分很復(fù)雜,,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分,。這些組分中,,有些對細胞生長是有利的,有些對細胞生長是無作用的,,有些對細胞生長反而是有害的,。研究表明過氧化氫誘導(dǎo)后的MSCs 出現(xiàn)衰老特征,在體外培養(yǎng)時,,這些活性氧(ROS)通過氧化 DNA,、蛋白質(zhì)等生物大分子對細胞造成傷害,加速細胞的衰老,。干細胞對微環(huán)境中 ROS 的累積水平特別敏感,,而血清中含有 ROS,可能會導(dǎo)致細胞內(nèi) ROS 大量聚集而引起細胞出現(xiàn)應(yīng)激誘導(dǎo)的早熟性衰老,。
9.從性能穩(wěn)定性來說
無血清培養(yǎng)基有明確的配方,,因此,,批間差極小,近乎沒有,。
而血清來自不同個體的牛,,由于牛的體質(zhì)不同,其血清中各種組分的差異很大,。比如血清中的 EGF,,有的含量為 10ug/ml,有的僅為 2ug/ml,,相差了 5 倍,。不同品牌間,甚至同品牌產(chǎn)品批次差別可能很大,。培養(yǎng)效果沒有保證,。
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