酶免疫試驗(yàn)之所以能成為臨床免疫檢驗(yàn)中的主導(dǎo)技術(shù),，是與它的方法上的特異性和靈敏性,、操作上的簡便性以及試劑的穩(wěn)定性分不開的，還有很重要的一點(diǎn)是,，其對環(huán)境沒有污染威脅,。
   盡管如此，作為一項(xiàng)免疫檢驗(yàn)技術(shù),，酶免疫試驗(yàn)還是有其局限性的,，不但所檢測的生物學(xué)體液樣本如血清中有可能存在各種干擾實(shí)驗(yàn)的因素，而且在實(shí)驗(yàn)過程中,，影響結(jié)果的因素也很多,，尤其是進(jìn)行手工的ELISA測定時。

   此外,，在定性ELISA測定中,，陽性判定值（CUT-OFF）的建立，是在一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)上的,，相對于某個具體的受檢者來說,，其有可能并不具備正確性。例如,，使用ELISA方法檢測抗HCV及抗HIV或HBsAg,，有時候，檢測所得的陽性結(jié)也許并不是真正的陽性,，而需要使用其他方法如重組免疫印跡（recombinantimmunoblotas—say,，RIBA）、蛋白印跡（Westernbl。t,，WB）或中和試驗(yàn)來確認(rèn),，才能報告陽性。這里抗HCV和抗HIV的檢測均使用病毒部分的基因工程抗原,，其他一些病毒如流感病毒,、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體后，亦或一些自身抗體,，也有可能會導(dǎo)致假陽性反應(yīng),。

   HBsAg的測定主要是弱陽性的問題，這與ELISA測定的“灰區(qū)”有關(guān)系,，處于cut-off值周圍亦即“灰區(qū)”的結(jié)果的可靠性通常較差,，陽性當(dāng)然需要確認(rèn)，陰性卻也未必是真,，這一點(diǎn)在血站篩檢獻(xiàn)血員血液時是非常重要的,，必須引起注意，并采取適當(dāng)?shù)拇胧?，防止此類?yán)重影響人們健康的傳染性疾病經(jīng)輸血傳播,，本書后面的有關(guān)章還會對此問題做詳細(xì)論述。此外,，免疫測定的基礎(chǔ)是抗原抗體的特異反應(yīng),，因此，如檢測抗原,，除了要求抗體（單抗或多抗）是特異的外,，還要求待測抗原上必須存在有能與所用抗體結(jié)合的抗原決定簇，如果因?yàn)榛蛲蛔儗?dǎo)致某些位點(diǎn)的不表達(dá),，或者結(jié)合位點(diǎn)因?yàn)槟承┰虮环忾]或阻斷,，都會影響抗體與抗原的結(jié)合，造成假陰性結(jié)果,。

   如檢測抗體,，則要求所用包被抗原應(yīng)盡可能包含所有的特異抗原決定簇，同時又盡可能不含有非特異的成分,，這一點(diǎn)往往由于技術(shù)水平的限制而難以*做到,，因此，從某種意義上來說,，假陽性假陰性是不能*避免的,，盡管通過努力，可以將其降至很低的程度,。這也是建立臨床免疫檢驗(yàn)方法所努力的方向,。