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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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關(guān)于細(xì)胞樣的保存

時(shí)間：2020/6/12閱讀：975
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一,、操作步驟：

 

1、在37℃ 5% CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上,，用培育基培育,，時(shí)間通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定；

 

2,、細(xì)胞長(zhǎng)好后,，用洗刷液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min,，蒸餾水洗刷,；

 

3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細(xì)胞,，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）

 

4,、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理；順次在70%,，90%,，100%的乙醇中浸泡，脫水每次
5min,，用二甲苯洗刷,，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%，90%,，70%乙醇中浸泡,，進(jìn)行再水化，每次5min,，后浸泡于洗刷液中,；

 

5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細(xì)胞,，以增加細(xì)胞對(duì)大分子試劑的通透性,，再用洗刷液洗5min；
?

6,、用1%甲醛固定10min,，用洗刷液洗凈。

 

二,、留意：

   
1,、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
    

2,、操作中重要的是及時(shí)固定,，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,，以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用,。此外,，過(guò)度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。

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