一、透析

透析就是利用小分子能夠通過,，而大分子不能夠通過半透膜的原理,，將大小分子量物質(zhì)分開的一種實(shí)驗(yàn)手段；在膜兩側(cè)存在濃度差時(shí),，溶質(zhì)從高濃度的一側(cè)（通常是樣品置于透析袋中）擴(kuò)散通過半透膜到低濃度的一側(cè)（透析溶液一側(cè)）直至膜兩邊濃度達(dá)到平衡,。如下圖所示：

利用透析分離物質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：樣品回收率高；操作簡(jiǎn)單,，無需繁瑣準(zhǔn)備工作,；成本低廉，可一次性使用,；分離條件溫和,；無需監(jiān)控

缺點(diǎn)：耗時(shí)較長(zhǎng)（24-48小時(shí)）；要求較為明顯的樣品和雜質(zhì)之間的分子量差（1-2個(gè)數(shù)量級(jí)）,。

二,、三種不同類型的透析袋

1、普通型透析袋

（1）把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段；

（2）在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘,；

（3）用蒸餾水*清洗透析袋,；

（4）放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘；

（5）冷卻后,，存放于4度,，必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋是必須戴手套,；

（6）用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出,，將之清洗干凈；

2. 再生纖維素透析袋:

此類型透析袋可耐受pH范圍是2.0~12.0,；耐受溫度是4~60℃,；不能煮，也不需要煮,，只需用純水*沖洗即可,。

3.纖維素透析袋:

此類型透析袋可耐受pH范圍是2.0~9.0；耐受溫度是4~37℃,；不能煮,，也不需要煮，只需用純水*沖洗即可,。

三,、透析袋的選擇

1.確定透析袋的分子量

在選擇適合截留分子量之前，首先要明確：欲保留在透析袋中的樣品和想要除去的雜質(zhì)的分子量,。

2.選擇普通型，再生型,，or纖維素透析袋

確定好分子量之后,，根據(jù)實(shí)際情況，樣品溶劑等,，選擇透析袋

3.正確選擇扁平寬度

透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量,。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴(kuò)散距離較長(zhǎng)透析較慢,。為易于使用,，建議使用總長(zhǎng)（包括閉合夾和頂部空間）為大約10-15cm的透析袋。

四,、透析袋的使用

下述透析程序是一個(gè)普遍的基礎(chǔ)透析過程,。在開始透析之前應(yīng)考慮到許多變數(shù)。透析樣品溶劑,、膜的化學(xué)相容性,、膜的截留分子量，透析溶劑、透析體積,、溫度等變量都會(huì)影響透析速率,，因此，一些應(yīng)用中下述透析過程可能需要適當(dāng)?shù)淖兓?/span>

a.把適量的透析液（緩沖液）加入透析裝置,。透析液的體積應(yīng)為樣品體積量的100倍,。（例如：在一升透析液中透析10毫升的樣品）

b.裁剪適當(dāng)長(zhǎng)度的透析管。預(yù)留一段額外長(zhǎng)度（約占總樣品體積量的20%）作為頭部空間

c.把透析管插入打開的透析夾,，在約超出透析夾3-5毫米的位置再夾住,。不要折疊透析袋

d.由透析管開口端將樣品裝入。調(diào)整一下頂部空間的長(zhǎng)度,，夾緊透析夾

e.把透析樣品放在合適的透析緩沖液中

f.透析要根據(jù)具體的應(yīng)用需求,。通常情況下，允許過夜透析,。在持續(xù)透析的過程中,，至少要進(jìn)行3次全部更換透析液。建議在（透析后）2-4小時(shí),，6-8小時(shí)和10-14小時(shí)（第2天早晨）更換透析液,。在后一次透析液的更換后要至少繼續(xù)進(jìn)行2小時(shí)的透析。

五,、使用注意事項(xiàng)

a.透析袋不能在純水中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,，會(huì)長(zhǎng)菌，用0.05%die氮化鈉溶液儲(chǔ)存

b.樣品按推薦的單位長(zhǎng)度容量加樣,，不可多加,，樣品濃度不可太大，否則容易導(dǎo)致膜漲破

c.樣品和透析液體積比一般是1:50~500

d.對(duì)于高濃度污染物,，樣品可能需要較長(zhǎng)的時(shí)間透析,，透析液需要更頻繁的更換。

e.透析溫度主要取決于樣品,。溫度限制主要取決于膜的類型,。纖維素透析袋可以承受的溫度高達(dá)37℃，再生纖維素透析袋可以承受的溫度高達(dá)60℃,。

六,、使用注意事項(xiàng)

在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存情條件下，保質(zhì)期為兩年,。干燥的透析袋要在室溫或4℃儲(chǔ)存在聚yi烯袋中,。一旦變濕，透析袋應(yīng)浸泡在下列之一的溶液中：0.05%die氮化鈉,，1%苯j(luò)ia酸鈉或1%甲醛,。（備注：一旦變潮濕,，不要讓透析袋干燥。不斷干燥會(huì)造成孔隙結(jié)構(gòu)不可恢復(fù)的倒塌）