酵母,，如釀酒酵母,、裂殖酵母和畢赤酵母，通常用于生物學實驗研究,。酵母是易于培養(yǎng)的單細胞真核生物,，他們的基因和蛋白質與哺乳動物具有很好的相似性，所以是的生物模型,。

酵母細胞用于研究基因功能,，蛋白質相互作用，細胞通路等,，也是大規(guī)模異源蛋白表達和小分子生產的宿主,，在發(fā)酵，釀造和制藥行業(yè)等起著*的作用,。涉及酵母的常見的實驗有酵母雙/三雜交系統(tǒng),，突變體篩選庫和同源重組，等等,。

一,、為什么我們需要酵母感受態(tài)細胞?

通常，在實驗過程中需外源DNA引入到酵母細胞,。引入基因片段（線性ssDNA或質粒）是通過酵母細胞的轉化來實現的,，具體方法有化學法，如醋酸鋰和聚乙二醇(PEG)或電穿孔法,。有效的酵母轉化需要高質量的酵母感受態(tài)細胞為開始,。勝任力則是指細胞能吸收游離的細胞外的遺傳物質(如質粒DNA)的能力。

二,、酵母感受態(tài)細胞的制備

獲得感受態(tài)細胞相當簡單,，但許多研究人員在實現良好的生存比例和轉換效率時  遇到問題。常見的誤區(qū)包括由于制備條件惡劣導致高的細胞死亡率,，或由于無效的感受態(tài)細胞制備導致轉化效率低,。

雖然酵母細胞和大腸桿菌一樣容易生長和轉化，但它們需要不同的處理方法來制備感受態(tài)細胞和轉化,。酵母細胞像哺乳動物細胞一樣,，有類似的處理程序。典型的酵母感受態(tài)細胞制備協議如下:

1. 過夜培養(yǎng)你想轉化的酵母菌菌株，使用營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基培養(yǎng)不含質粒的細胞,。對于已經含有質粒的細胞,，使用適當的選擇性培養(yǎng)基來維持質粒。

2. 當細胞密度達到1 - 2 x 107cells/mL,，離心收獲細胞,。細胞密度可以通過使用分光光度計在OD600檢測，或者使用血球計在顯微鏡下計數細胞,。

3. 沖洗細胞,，重懸于無菌水，離心,，棄上清,，重復此步驟兩次以*清洗細胞。

4. zui后一次洗完,，將細胞重懸于感受態(tài)細胞溶液,，分裝，大約每管108個細胞,，每個轉化反應將使用這些數量的細胞,。分裝好的管子放于-80°C，供以后實驗使用,。

5. 在所有步驟中,使用質量好的無菌過濾器消毒過的試劑,以防止污染問題,。

感受態(tài)細胞溶液包含*濃度的冷凍保護劑，這些濃度應該在你的實驗室標準化,，根據使用的酵母菌株和細胞的濃度,。標準協議使用5%的甘油 + 10% DMSO溶液混合,這種配方被廣泛應用來制備感受它細胞，也可根據具體情況進行輕微的改變或調整,。

關于冷凍保護劑

甘油和二甲亞砜(DMSO)是zui常見的細胞可透過性冷凍保護劑,，用于準備感受態(tài)細胞。它們穿透細胞,，防止冰晶的形成,，冰晶可能會在凍結過程中導致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺點,，他們可能會導致細胞毒性,特別是在解凍過程中,。非細胞透過性的試劑如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇鈣也是一個好的冷凍保護劑,，尤其適用于電穿孔制備感受態(tài)細胞。

三,、酵母感受態(tài)細胞的儲存

每次轉化時使用新鮮的感受態(tài)細胞是明智的,，因為長時間儲存，轉化效率會降低，但這并不總是可行的,。

感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長達一年,，沒有轉化潛能的損失。然而, 瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的,。感受態(tài)細胞需要在冷凍保護劑中,，像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。

1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存,。

2. 用紙片等將盒子里的細胞管隔開,，分成多個小格子。

3. 復蘇過程中,，在37°C解凍細胞,，轉化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。