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當(dāng)前位置:上海美譜達(dá)儀器有限公司>>技術(shù)文章>>超微量分光光度計如何檢測蛋白,?
蛋白和核酸不一樣,具有很強(qiáng)的多樣性,。Protein A280功能應(yīng)用于檢測那些含有Trp,、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280nm吸光度明顯,。本機(jī)方法不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,,而是檢測吸光度后,直接計算蛋白濃度,。
Protein A280顯示紫外吸收光譜,,檢測280nm處的吸光度后計算濃度(mg/ml),。和核酸檢測一樣,Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù),。
Nano-600在基座模式下可以多檢測90mg/ml的BSA而不用稀釋,。
當(dāng)檢測樣品的吸光后的光強(qiáng)小于200時(10mm光程下),軟件會提示用戶選擇更小的測量光程,,以保證測試的準(zhǔn)確性,。
決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵,通常情況下,,水中的物質(zhì),,如蛋白、鹽離子,、去污劑等都會通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力,。雖然對于大部分樣品來說,1ul的量就足夠用于檢測了,,但由于表面張力下降,,我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。
可選擇或取消基線校準(zhǔn),。蛋白檢測默認(rèn)的基線校準(zhǔn)波長為340nm,,用戶可根據(jù)試驗需要輸入不同的校準(zhǔn)波長。在任何情況下,,基線都自動設(shè)定為選擇波長下的吸光度,,所有波長的吸光度讀數(shù)都是減去這個值的結(jié)果。
注意:基線校準(zhǔn)必須在進(jìn)行樣品檢測之前設(shè)定,,樣品檢測之后設(shè)定無效,。不選擇基線校準(zhǔn),光譜值將會產(chǎn)生偏移,,計算的濃度也會改變,。
⑵操作步驟:
①設(shè)定項目名稱和樣品編號與蛋白類型;
②使用緩沖液建立空白對照:取2ul空白溶液加到下基座上,,放下上基座并點擊“空白",;
③使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;
④取2ul樣品滴加到下基座上,,放下上基座,,點擊“樣品"進(jìn)行檢測;
注意:每次檢測的樣品都必須是剛加入的,。
⑤檢測完成后,,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個樣品。
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