影響色譜柱性能因素有:一、物理因素:
(1) 硅膠純度:硅膠純度和殘留金屬離子濃度,,硅膠的雜質會影響化合物的峰形,,硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾,。
(2) 色譜柱尺寸填料床的長度和內徑,,增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,,但也會升高壓力和導致峰展寬,;寬柱徑,提高載樣量,,但也會增加橫向擴散,,同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑,,可減少橫向擴散,,但壓力較大,,對系統(tǒng)要求較高。
(3) 顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高,、重現(xiàn)性好,、柱床結構均勻,不規(guī)則形柱床結構不均勻,、流動相線速度不均勻,,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,,粒徑越小,,柱效越高,柱壓也越高,。粒徑分布越廣則柱效越低,,壓力越大。
(4) 顆粒表面積:顆粒外表面和內部孔表面的總和,,以m2/g表示,,相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力,更大的柱容量和分離度,。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài),,更適合梯度洗脫程序。
(5) 孔徑:顆粒的孔或腔的平均尺寸,,范圍是80~300?,,大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質在填料表面的滯留時間,,改善分離,,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。
二,、化學因素:
(1) 鍵合類型及鍵合相:鍵合相分子與基體單點相連為單體鍵合,,這種鍵合方式可以提高傳質速率,縮短柱平衡時間,,,;聚合體鍵合為鍵合相分子與基體多點相連,這種鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性,,增加載樣量,。而鍵合相不同會直接影響化合物的保留行為。
(2) 碳覆蓋率:高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性,,但分析時間長,。
(3) 封端:硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基,如圖封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應,,改善保留和峰行,,這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術也會直接影響色譜柱的效能,。
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