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超濾離心管常見問題

時(shí)間:2017/7/14閱讀:6378
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離心管是一個簡單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀,。超濾離心管會有一個類似于內(nèi)管和外管的兩個部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時(shí),分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內(nèi)管中),就是超濾的原理.常用于濃縮樣品,。

超濾離心管的分子量選擇:
     按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,,為了得到zui高的收率,,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,,不超過目標(biāo)分子量的一半,。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑,,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,,因此截留孔徑越小,,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心,。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管zui大容積再離心,,重復(fù)2次可除去99%鹽,。避免過長時(shí)間或者過速離心,雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì),,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附,。避免過度濃縮,zui終體積越小,越容易因表面吸附而損失得率,。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,,必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,,能提高回收率,。盡量避免Tips接觸膜表面。

超濾離心管是否要預(yù)處理:
     超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用,,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附zui小化,,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會有問題,。非特異結(jié)合的程度隨著個別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面,。對超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,,因?yàn)槿芤嚎商顫M膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用zui高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上,,蒸餾水*沖洗柱子,,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了,。如果要留待以后使用,,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。

常用的鈍化溶液可選擇:
1,、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
2,、5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
4,、5%Triton-X 蒸餾水溶液
5,、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
超濾離心管因?yàn)樾枰咚匐x心,,某些對剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合,。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,,對于有微小顆?;蛘咚槠臉悠罚芟扔幂^大孔徑的超濾管過濾一次,,再進(jìn)行下一步濃縮,。

超濾離心管是否可以重復(fù)使用:
     離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價(jià)格并不便宜,不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗(yàn)是用蒸餾水清洗膜表面多次,,離心一次到兩次,,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會好些,??芍貜?fù)用于同一樣品,不用時(shí)可用蒸餾水浸泡,,但是要防止細(xì)菌污染,。不同樣品就不要混用了。有人說泡在20%酒精,、1N的NaOH(氫氧化鈉)中,,防止長菌,而且防干,,只要超濾膜侵了水,,就不可以再讓它干,但也有人說會破壞膜結(jié)構(gòu),。反正廠家一般不支持重復(fù)用,。多次重復(fù)使用會堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

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