日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

HCPure™多模式層析填料助生物制品高效純化

近年來，生物制藥行業(yè)呈現(xiàn)出繁榮發(fā)展的趨勢,，很多大分子生物制品已經(jīng)過監(jiān)管部門批準上市,，另有不少創(chuàng)新型大分子正處于臨床后期或上市前申報階段，即將為患者帶來福音,。例如,，基于CHO細胞表達的單克隆抗體、基于大腸桿菌（E.coli）體系表達的重組蛋白或納米抗體,、基于HEK293細胞或昆蟲細胞SF9表達的腺相關(guān)病毒（AAV）,、基于酵母細胞表達的病毒樣顆粒（VLP）等。不同于傳統(tǒng)的小分子化學藥,，生物大分子的表達體系更為復雜,，雜質(zhì)種類更多（如宿主蛋白（HCP）和宿主DNA殘留(HCD)等），雜質(zhì)結(jié)構(gòu)相對復雜,，這給下游純化帶來了極大的挑戰(zhàn),。

         基于傳統(tǒng)微球技術(shù)的層析工藝是生物大分子純化的重要手段，其具有工藝性能穩(wěn)定,、放大性良好等優(yōu)點,。近年來，多模式層析填料受到越來越多的關(guān)注,。多模式層析填料往往具備至少兩種相互作用機制,，其中最常見的是將離子交換模式與疏水相互作用模式結(jié)合，可以在廣泛的pH和電導率范圍內(nèi)有效純化目標分子,。

圖1. HCPureTM配基結(jié)構(gòu)和作用方式

HCPureTM是英國Astrea Bioseparations公司2023年推出的多模式層析填料,，填料基架為粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖，基架上修飾有化學合成的小分子配基（圖1）,，主要以疏水相互作用的方式結(jié)合料液中的雜質(zhì),，同時兼具氫鍵相互作用模式（與市售主流產(chǎn)品作用原理不同,，形成互補），適用于多種表達體系,，在廣泛的上樣條件下,，能穩(wěn)健的去除料液中的HCP（宿主細胞蛋白）、HCD（宿主細胞DNA）,、聚集體,、分子片段等工藝或產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。表1展示了HCPureTM在常見的表達體系中雜質(zhì)去除能力,。

表1. HCPureTM在多種表達體系中的應用效果

1. HCPureTM在大腸桿菌（E. coli ）表達體系中可以有效去除HCP

在該應用案例中,，研究人員使用大腸桿菌（E. coli ）表達納米抗體Vκ，收獲液先經(jīng)過Protein L親和層析純化,，洗脫液經(jīng)中和后調(diào)節(jié)成不同的pH（6.0-8.0）和電導率（6-18mS/cm）,，隨后以流穿模式上樣HCPureTM，收集流穿液和淋洗液,，檢測Vκ和HCP的含量,，以探究HCPureTM的最佳上樣條件。測試條件如下表所示：

圖2. E.coli表達體系中HCPureTM上樣pH和電導率的探究

由圖2的檢測結(jié)果可知,，在較低的pH（6.0）和較低的電導率（6ms/cm）上樣條件下,，HCP的去除佳，同時目標分子Vκ的回收率最高,。在優(yōu)化上樣條件下,，料液中的HCP可以從30000ppm降至200ppm（2個log值的去除能力），Vκ回收率大于85%（表2）,。

表2. HCPureTM在E. coli 表達體系中可以有效去除HCP

2. HCPureTM在CHO細胞表達體系中可以有效去除HCP

在該應用案例中，研究人員使用CHO細胞表達IgG型單克隆抗體,，澄清后的收獲液先經(jīng)過Protein A親和層析純化,，洗脫液經(jīng)中和后調(diào)節(jié)成不同的pH（4.0-9.0）和電導率（8-18ms/cm），再以流穿模式上樣到HCPureTM中,，收集流穿液和淋洗液,，檢測IgG和HCP含量，其中,，pH 6.0,、電導率12ms/cm是未經(jīng)調(diào)節(jié)的親和層析洗脫中和液。

表3. CHO細胞體系中,，不同上樣pH和電導率條件下,，HCPureTM均可有效去除HCP

由表3的檢測結(jié)果可知，在廣泛的上樣pH和電導率范圍內(nèi),，HCPureTM均可有效的去除上樣料液中的HCP（平均84%）,，同時保持目標分子的高回收率（平均87%）,。此外，由于pH 6.0,、電導率12mS/cm是初始的親和層析洗脫中和液,，因此，親和層析后,，料液可不經(jīng)過調(diào)整或緩沖液置換,，直接上樣到HCPureTM中，同樣保持優(yōu)秀的回收率和HCP去除效果,，且大大節(jié)約了工藝時間和成本,。

3. HCPureTM在CHO細胞表達體系中可以有效去除聚集體

在該應用案例中，研究人員使用CHO細胞表達IgG型單克隆抗體,，料液經(jīng)過Protein A親和層析和陽離子交換層析純化后,，在較低的pH和較高的電導率條件下孵育，誘導產(chǎn)生高含量的聚集體,，再以流穿模式上樣HCPureTM,，收集流穿液和淋洗液，檢測聚集體含量,。

表4. HCPureTM可顯著去除抗體料液中的聚集體

由檢測結(jié)果（表4）可看出,，料液經(jīng)過HCPureTM純化后，聚集體由初始的6.7%降低到2.9%,，HCPureTM可顯著去除料液中的聚集體,。

4. HCPureTM在HEK 293細胞表達體系中可以有效去除HCP

在該應用案例中，研究人員使用HEK293細胞以瞬轉(zhuǎn)的方式表達2型腺相關(guān)病毒（AAV-2）,，病毒載體經(jīng)過親和層析純化后,，仍含有較高含量的低分子蛋白雜質(zhì)，將親和層析洗脫液置換到PBS+200mM NaCl（pH 7.5）中,，以流穿模式上樣到HCPureTM（10mm內(nèi)徑層析柱,，柱高10cm），總上樣量為5.0E+13VP,，收集流穿液和淋洗液進行分析,。

圖3. SDS-PAGE檢測結(jié)果

表5. ELISA檢測結(jié)果

由SDS-PAGE結(jié)果（圖3）可看出，流穿液中包含大部分病毒衣殼蛋白VP1,，VP2和VP3條帶（8-13泳道）,，而再生液（14泳道）中則包含大量的低分子蛋白雜質(zhì)條帶，表明HCPureTM可以有效去除料液中的蛋白雜質(zhì)分子,。由ELISA檢測結(jié)果（表5）可知,，流穿液中的病毒衣殼蛋白幾乎全部回收（接近100%），表明HCPureTM在去除蛋白雜質(zhì)的同時可以保持優(yōu)秀的AAV回收率,。

 HCPure™多模式層析填料助生物制品高效純化

HCPureTM多模式層析填料技術(shù)參數(shù)

HCPureTM多模式層析填料產(chǎn)品信息

散裝填料

預裝柱

如您對上述產(chǎn)品感興趣,，歡迎點擊這里填寫信息,，Astrea Bioseparations技術(shù)專家將為您提供個性化優(yōu)化方案,，切實幫您解決純化工藝中的疑難問題,。

Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學，擁有超過30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,，是層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務供應商,。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過21個生產(chǎn)工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發(fā)和生產(chǎn)基地,，專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供層析介質(zhì)和技術(shù)服務,。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù)，解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時問題,，實現(xiàn)更快、更環(huán)保,、更具成本效益的純化過程,，符合當今生物治療創(chuàng)新的需求,。

西美杰是Astrea Bioseparations中國區(qū)代理，為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務,。

北京西美杰是Astrea Bioseparations 授權(quán)的中國區(qū)代理，為各大科研院所,，研究機構(gòu),、企業(yè)等客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與服務,，也收到廣大客戶的好評,。北京西美杰是Astrea Bioseparations 代理，Astrea Bioseparations 中國代理,，Astrea Bioseparations 北京代理,，Astrea Bioseparations 總代理,，Astrea Bioseparations 上海代理,，Astrea Bioseparations 全國代理，Astrea Bioseparations 西北代理,，Astrea Bioseparations 西南代理,，Astrea Bioseparations 東北代理，Astrea Bioseparations 華北代理,，Astrea Bioseparations 華南代理,，Astrea Bioseparations 華中代理,。

參考文獻：

1. J. Kreusser et al., Influence of pH value and salts on the adsorption of lysozyme in mixed-mode chromatography, 2021

2. R. Hess et al., Standardized method for mechanistic modeling of multimodal anion exchange chromatography in flow through operation, 2023

3. Technical Note: HCPURE™: A FIT FOR PURPOSE HOST CELL PROTEIN CLEARANCE SOLUTION IN E. COLI WORKFLOWS, Astrea Bioseparations

4. Technical Note: HCPure™ host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea Bioseparations

5. Technical Note: HCPure™ host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea Bioseparations

6. Technical Note: HCPURE™: HOST CELL IMPURITY REMOVAL IN CHO WORKFLOWS, Astrea Bioseparations

7. Technical User Guide: HCPureTM, Astrea Bioseparations