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腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中使用廣泛的傳遞機制,。近年來,，基于AAV病毒開發(fā)的基因療法的研發(fā)及臨床試驗注冊項目數量呈指數級增長,，截至目前,，美國FDA已批準五項AAV療法,，同時,，用于基因治療的AAV也是全球市場上最為昂貴的藥物之一,，其中售價最高的Hemgenix®，每劑價格約為350萬美元,。由于該療法每劑量可能需要1011-1016載量的AAV病毒,，如何實現(xiàn)高效的AAV生產，已成為工藝流程優(yōu)化中的重要一環(huán),。

西美杰代理的Mirus成立于1996年,，在核酸遞送領域深耕多年，TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑支持AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商業(yè)級別生產,。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺,，PEI)，Mirus將多聚物及脂質技術進行多重組合,，針對不同細胞類型,，不同應用場景，有著不同轉染方案,。

Mirus遞轉平臺Polymers + Lipids的多重,、多功能組合

RevIT™ AAV Enhancer提高AAV產量的利器

   在病毒生產工藝方面，除了需要克服細胞遞轉過程中的多重阻礙,，以實現(xiàn)更高效轉染和更低細胞毒性,；增強子的加入，還可大幅度提升多種血清型AAV病毒生產載量,。但Mirus并沒有止步于此,，為了進一步提高下游生產中的AAV產量， 今年七月底西美杰代理的Mirus發(fā)布用于AAV生產的RevIT™ AAV Enhancer,，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑或其他品牌轉染試劑 (如PEI等),。基于HEK293懸浮細胞數據，相對于老版本AAV增強子，RevIT™ AAV Enhancer可將AAV基因組滴度提高1.2-4.9倍,，并且使用更便捷，非常容易整合入現(xiàn)有的AAV生產工藝流程中,。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出，使得AAV上游生產成本進一步降低成為可能,，進而降低基因治療藥物單劑量成本,。

RevIT™ AAV Enhancer

RevIT™ AAV Enhancer：可以將AAV基因組滴度提升1.2-4.9倍

實驗結果顯示,，平行對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強子(VirusGen + Enh 1.0)和新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),，針對AAV2,、AAV8、AAV9不同血清型,，基因組滴度分別有著1.6,、4.9以及1.2倍提升,。除此之外,，在測試的所有血清型中,，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上收獲了更高比例的實心率 (圖1),。該結果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試劑時,，新版本增強劑RevIT™ AAV Enhancer可顯著提高AAV基因組滴度(GC/mL)及實心率(%Full Capsids),。

圖1 . 相比Mirus老版本增強子，加入RevIT™ AAV Enhancer后,，可將AAV基因組拷貝數提升1.2-4.9倍,，同時改善AAV病毒實心率。

RevIT™ AAV Enhancer具有廣泛適配性,，搭配其他品牌轉染試劑（如PEI）,，AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測試兩個品牌轉染試劑：Polyplus FectoVIR®轉染試劑(“Polymer F")以及Polyplus PEIpro®轉染試劑(“Polymer P")，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer,，針對不同血清型AAV2,、AAV8、AAV9,，AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x,、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2),。實驗結果表明,，在搭配其他品牌病毒轉染試劑時，Mirus RevIT™ AAV Enhancer也可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL),。

圖2. “Polymer F"以及“Polymer P"病毒轉染試劑搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer,，針對不同血清型AAV，其病毒基因組滴度都有著顯著提升,。

RevIT™ AAV Enhancer具有廣泛的適配性,，可適用于不同培養(yǎng)基體系

Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試劑搭配RevIT™ AAV Enhancer，在不同品牌的病毒生產培養(yǎng)基中,，具有很好的兼容性,。測試使用293-VP 2.0細胞，搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific),。實驗結果表明,，針對不同血清型AAV2、AAV5,、AAV8,、AAV9，RevIT™ AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實驗條件下,，AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異（圖3）,。

圖3. 更換不同品牌病毒生產培養(yǎng)基，AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異,。

RevIT™ AAV Enhancer實驗流程更靈活,，在轉染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

為了進一步確認加入RevIT™ AAV Enhancer來提高AAV產量是否需要嚴格把控加入時間,，平行測試了不同加入的時間點，包括轉染前30min或60min,、轉染時及轉染后,。實驗結果顯示，相比于對照組,，在不同時間點加入RevIT™ AAV Enhancer,， AAV8病毒基因組滴度均有穩(wěn)步的提升(2倍)，并且病毒實心率也穩(wěn)定保持在相同水平（圖4）,。該實驗結果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入時間點的靈活性,，一定程度上簡化了生產工作流,。

圖4.  RevIT™ AAV Enhancer在轉染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

 RevIT™ AAV Enhancer提高AAV產量的利器

實驗tips：如何進行病毒轉染試劑評估？什么是病毒載量,？如何檢測,？

  更多詳細信息，請查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ,，更加詳細地介紹了檢測和計算病毒滴度的詳細方法,。

相關產品信息及鏈接

 
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Mirus產品年鑒

   西美杰代理的美國Mirus公司成立于1995年,，是世界上很早開發(fā)高效,、低毒轉染試劑的公司，同時也是該類試劑的主要供應商之一,。其產品線涵蓋化學轉染試劑,、電轉染產品、病毒生產和轉導產品,，適用于基因功能研究,、蛋白生產、病毒載體生產和動物模型構建等領域,。Mirus許多杰出成果獲得廣大用戶的好評,。

   北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理，始終秉承著專業(yè),、嚴謹的態(tài)度為客戶提供優(yōu)質的產品與服務,，Mirus熱銷轉染產品常備現(xiàn)貨。西美杰是Applichem代理,，KERRY代理,，Pfanstiehl代理,，Cygnus代理，c-LEcta DENARASE®代理,，SeraCare (KPL)代理,，Lifespan（LSBio)代理，Phytotech代理,，Agrisera代理,，Cali-Bio代理，Jena Bioscience代理,，Immundiagnostik代理,，Advanced BioMatrix代理，Mirus代理,，Alzet代理Genetics代理,，Cell Biolabs代理，MYOCEA代理,，Gropep代理,，MyBioSource代理，Hampton代理,，LeeBio代理,，Cal Bioreagents代理，Everest Biotech代理,，Nordic-Mubio（SCICONS）代理,，Exalpha代理，SCIGEN代理,，MiTeGen代理,，Prospec代理，歡迎大家咨詢訂購,。