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北京西美杰科技有限公司
主營產(chǎn)品： 生物學(xué)檢測試劑盒,化學(xué)試劑,蛋白質(zhì)氧化損傷,抗原抗體 |
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更新時間：2022-07-20 09:36:44瀏覽次數(shù)：569
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什么是支原體,？
支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑 0.2μm)并獨立生活的微生物,，沒有細胞壁,，表面由胞質(zhì)膜構(gòu)成,，約有 1%的支原體可通過濾菌器。支原體污染細胞后,，培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁,，多數(shù)情況下細胞病理變化輕微或不顯著。細微變化也可由于傳代,、換液而緩解,，因此易被忽視。但個別嚴重者,，可致細胞增殖緩慢,，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體污染細胞后會影響下游試驗結(jié)果,。
為什么要重視細胞培養(yǎng)中的支原體污染,？
1、污染率高：在細胞研究領(lǐng)域,，支原體是臭名昭著的污染源,，二十世紀九十年代的支原體污染率是四分之一，而目前有仍然有超過十分之一的基因表達研究（許多曾發(fā)表在頂尖雜志上）,，表現(xiàn)出支原體污染的跡象,；
2,、影響日趨嚴重：雖然支原體污染并不一定意味著研究結(jié)果無效，但它會影響數(shù)百個基因的表達,，并與細胞競爭營養(yǎng)阻礙細胞的生長,。在目前測試的一組受污染的數(shù)據(jù)中（淋巴瘤細胞），已經(jīng)鑒定出 61 個被支原體改變的基因,，干擾了實驗結(jié)果,。這無疑是對時間，資源,，經(jīng)費很大的浪費,；
3、難察覺：支原體污染*難以察覺的,，污染后的細胞生長速率一般并未發(fā)生顯著的影響,，無法用肉眼識別，除非采用專門的支原體檢測方法檢測,；
4,、污染源多：“草率操作"、細胞系流通的交叉污染,、操作人員自身都是很重要的污染源,；
5、難去除：支原體體積小,，無細胞壁,，約有 1%的支原體可通過過濾器，且一般抗生素根本無法有效抑制或者去除支原體,，另外,，部分抗生素使用后會對細胞產(chǎn)生敏感效果，從而影響細胞的狀態(tài),；
6,、重視程度日益增加：學(xué)術(shù)雜志發(fā)表實驗結(jié)果需驗證支原體污染影響，在國際上,，支原體污染檢測已經(jīng)日益成為細胞培養(yǎng)污染常規(guī)檢測之一,，同時也是有效規(guī)避支原體污染的重要方法之一。
世界性難題?。,。?！Nature 収布癿文獻表明細胞研究領(lǐng)域中存在嚴重的支原體污染問題
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
如何保護細胞細胞不受支原體的污染,？
西美杰代理的德國PanReac Applichem 所提供Myco 系列支原體清除產(chǎn)品可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性，從而有效地清除支原體污染，而且沒有細胞毒性,。另有支原體檢測與預(yù)防系列產(chǎn)品可以給細胞提供更多的安全保護,。
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測方案
一、AppliChem 支原體清除系列
對于普通細胞系,，遭受污染以后可以通過重新復(fù)蘇,，購買等途徑更換樣本，但是對于一些較難獲得的珍貴樣本,，如干細胞,，原代細胞，經(jīng)過特殊處理的,，或訂購困難的細胞,，一旦遭受支原體污染后，一定要馬上進行處理,。AppliChem研發(fā)的支原體清除的 Myco 系列產(chǎn)品,，可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性，從而有效的清除支原體污染,，并可以針對不同程度,，不同細胞樣本進行針對性處理，處理過程簡單,，對細胞不會造成任何副作用,。
名稱 | 主要成分 | 適用樣本 | 使用斱法 |
Myco-3 （貨號 A5240） | 環(huán)丙沙星 | 貼壁細胞,，可清除大多數(shù)支原體污染 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,，每 2-3 天換液，連續(xù)處理14天 |
Myco-1 （貨號 A5222） | 泰妙菌素 | 貼壁細胞,，配合能解決頑固型支原體或者使用 Myco-3 處理停用后又出現(xiàn)支原體污染的情況 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,，與 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 處理 4 天后換 Myco-2 處理 3 天,，如此重復(fù) 2-3 次即可 |
Myco-2 （貨號 A5233） | 二甲胺四環(huán)素 |
二,、AppliChem 細胞污染預(yù)防系列
有效保護細胞的最好方式是對于細胞培養(yǎng)環(huán)境的預(yù)防，如工作環(huán)境定期消毒處理,，嚴格實驗操作,，保證器皿無菌等各方面。在實驗室中,，CO2 培養(yǎng)箱,，CO2 培養(yǎng)箱水盤，水浴鍋是非常重要的污染源,。AppliChem 研發(fā)有系列污染預(yù)防系列產(chǎn)品專門針對這 3 大污染源,，可有效預(yù)防真菌（及芽孢）、細菌、病毒等污染,。使用方便,，無腐蝕性，安全高效,。
名稱 | 適用環(huán)境 | 預(yù)防微生物 | 使用斱法 |
Incubator-Clean （貨號 A5230） | CO2 培養(yǎng)箱,， 工作等臺等 | 支原體，真菌及芽孢,、細菌,、病毒（包拪 HIV，HBV 等） | 即用型,，噴霧處理*濕潤即可,，無需轉(zhuǎn)移出細胞，建議每 2 周處理一次 |
Incuwater-Clean （貨號 A5219） | C02 培養(yǎng)箱水盤 | 支原體,，真菌及芽孢,、細菌、病 毒（包拪 HIV,，HBV 等） | 100 倍稀釋加入水盤滅菌水中,，建議每 2-4 周更換滅菌水 |
Aquabator-Clean （貨號 A9390） | 水浴鍋 | 細菌，真菌 | 100 倍稀釋加入水浴鍋，建議每 1-2 周吐水浴鍋加入一次,，每 4-6 周給水浴鍋更換一次水 |
三,、Applichem 支原體檢測系列
傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測,、DNA 熒光染色檢測以及 PCR 檢測，除 PCR 檢測方法以外,，其他檢測方法大多耗時長,，要求檢測人員具有豐富的經(jīng)驗，并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性,，對于一些稀有的支原體亞種無法有效檢測,。
AppliChem 設(shè)計的支原體檢測試劑盒系列產(chǎn)品均是基于 PCR 方法，根據(jù)支原體 16S rRNA 保守序列設(shè)計引物,，經(jīng)過 PCR 反應(yīng)擴增其 16S rRNA 片段,，后采用瓊脂糖電泳方法檢測 270bp 條帶。相對傳統(tǒng)方法而言,，具有強大優(yōu)勢：
高靈敏度：敏感度高達 100~1000CFU/ml,，僅需 要 0.5 - 1.0 ml 細胞上清樣本即可檢測；
檢測品種廣泛：可檢測常規(guī)品種,，同時對于稀有 亞 種 也 能 同 效 檢 測 ,， 如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis,，幾乎覆蓋自然界 80 余個品種；
快速：操作時間只需 30 分鐘,，全程 5 個小時內(nèi) 即可得到檢測結(jié)果,；
可靠：試劑盒中包括有陽性對照 DNA，可保證 實驗結(jié)果的可重復(fù)性,，減小因操作帶來的誤差,；
安全性：無支原體培養(yǎng)過程，有效避免污染擴大,。
產(chǎn)品型號 | 檢測方法 | 適用儀器 | 試劑盒組分 |
PCR Mycoplasma Test Kit （貨號 A3744） | 普通 PCR-電泳檢測 | 普通 PCR 儀器 | Reaction Mix Buffer Solution Positive Template Control |
qPCR Mycoplasma Test Kit （貨號 A9019） | 熒光定量 PCR | LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®. | Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE) Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE) |
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測方案
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