本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

羊小反芻獸疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書（山羊）

【產(chǎn)品名稱】
通用名：羊小反芻獸疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus,，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病,，其特征為口腔、舌粘膜糜爛,、流淚,、流鼻液。本病的易感動(dòng)物為山羊,，也可感染綿羊,、白尾鹿等，但對(duì)牛無感染性,。
本試劑用于檢測(cè)山羊血清中小反芻獸疫病毒抗體,，可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)?；用酶?biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。
【試劑盒組成】 

【儲(chǔ)存及有效期】 儲(chǔ)存于陰涼干燥處（2-8℃）,，有效期期12個(gè)月。
    包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,，混勻）,。陰、陽性對(duì)照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔,、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰,、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,，置37℃（推薦水?。┓磻?yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照≤0.10，陽性對(duì)照≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽性,；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性,。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明羊只抗體水平不足,，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)山羊血清,、血漿中小反芻獸疫病毒抗體,，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中,、弱的粗略評(píng)估,。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。