本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

雞新城疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】雞新城疫病毒抗體檢測試劑盒
通用名：（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 新城疫又名偽雞瘟或亞洲雞瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,，NDV）引起的禽類的一種急性高度接觸性傳染病，以呼吸困難,、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂,、粘膜出血為特征,。
本試劑用于檢測禽類血清中新城疫病毒抗體，可用于免疫效果評價,、輔助診斷等,。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被新城疫病毒抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中新城疫病毒抗體,。實驗時，在酶標(biāo)板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后,，若樣品中含有新城疫病毒的抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)椋挥妹笜?biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有新城疫病毒抗體,。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,，混勻）。陰,、陽性對照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存,。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻,，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照≤0.20，陽性對照≥0.6,。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）,；
2.樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性,。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中新城疫病毒IgG抗體,，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中,、弱的粗略評估,。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解,。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮,。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號試劑組分不得混用,。