本人在剛開始做大鼠ELISA試劑盒時就面臨很多困難,，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊涂,，比如說花板,，假陽性，全顯色,，全部顯色，顯色比空白還低,。,。。,。,。。自己也為此苦惱過很長一段時間,，隨著自己技術(shù)水平得提高,，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧,，現(xiàn)在做方陣,，做ELISA已是輕車熟路了,，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色,，一個工作日基本搞定,。

下面就由我拋磚引玉地來說一下:

1.正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,，說明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清或BSA等封閉,。

2.在ELISA中,，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。

（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時,。大鼠ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml,。