在病原體急性感染的診斷中，通常需檢測(cè)IgM抗體,，如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測(cè),、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測(cè)和TORCH項(xiàng)目的系列IgM檢測(cè)等。IgM抗體也有使用間接法測(cè)定的,，如目前在市場上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測(cè)試劑盒,。在使用間接法測(cè)IgM抗體時(shí)，由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體,，其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競爭與固相抗原結(jié)合,，從而干擾IgM抗體的檢測(cè)。
因此,，在使用間接法測(cè)定IgM抗體時(shí),，通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或SPA預(yù)處理，以去除IgG的干擾,。這樣不但測(cè)定較為繁瑣,，而且影響測(cè)定的特異性和靈敏度。目前,，常用的IgM抗體檢測(cè)方法為捕獲法,，即以抗人IgM抗體（抗人u鏈）作為固相抗體，當(dāng)加入血清標(biāo)本時(shí),，其中的IgM類抗體（特異的和非特異的）即可被固相抗體捕獲,，再加入特異抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后,，加入酶標(biāo)抗特異抗原的抗體,，zui后加入底物顯色。具體操作步驟如下：
1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相,，形成固相抗體,，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì),。
2．加入含待測(cè)IgM抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時(shí)間后洗板,；此時(shí),，待測(cè)樣本中的IgM抗體就會(huì)與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上。
3．加入特異的抗原如HAV抗原,、HBcAg等,，溫育一定時(shí)間后洗板,；此時(shí),，特異抗原就會(huì)與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng),。
4．加入酶標(biāo)記的抗特異抗原的抗體，溫育一定時(shí)間后洗板,；此時(shí),，在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。
5．加入酶底物,，溫育顯色測(cè)定（圖2—10）,。
本方法要著重注意的是RF（1gM類）及其他非特異IgM的干擾。RF（1gM類）由于其能與固相抗人u鏈抗體結(jié)合,，并可與隨后加入的酶標(biāo)抗體（動(dòng)物IgG）反應(yīng),，從而導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。而非特異IgM由于其在*步溫育中,，可與特異IgM競爭與固相抗體結(jié)合,，所以會(huì)影響測(cè)定的靈敏度。因此,，使用本法測(cè)IgM,，必須對(duì)臨床樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋。樣本稀釋后,，上述產(chǎn)生干擾作用的非特異IgM含量減少,，而特異IgM由于處于相應(yīng)病原體的急性感染期，滴度很高,，一定稀釋后,，不會(huì)有明顯影響，況且,，在某些病原體如HBV的慢性感染階段,，IgM類特異抗體也能持續(xù)存在，只不過滴度要低很多,。
因此,，如不對(duì)血清樣本稀釋，就直接檢測(cè),，即使是沒有非特異IgM的干擾,，陽性測(cè)定結(jié)果也沒有急性感染的診斷價(jià)值。現(xiàn)在,，有些試劑生產(chǎn)廠家,，為了迎合臨床實(shí)驗(yàn)室減輕勞動(dòng)強(qiáng)度、簡便操作的要求,，生產(chǎn)了不需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA試劑盒,，現(xiàn)有不少實(shí)驗(yàn)室也在使用,。鑒于上面提到的原因，我們建議臨床實(shí)驗(yàn)室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等類檢測(cè)時(shí),，應(yīng)使用對(duì)樣本進(jìn)行稀釋的試劑盒,，以保證檢測(cè)的臨床價(jià)值。
