PCR：聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction, PCR）,一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),，它可看作是生物體外的特殊DNA復制,，PCR的大特點，是能將微量的DNA大幅增加,。PCR的原理：PCR的基本過程類似于DNA的天然復制,，特異性依賴于與靶序列兩端互補的Oligo引物。整個過程由變性-退火-延伸3個基本反應步驟構(gòu)成,。

PCR實驗中擴增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散的原因如下：

（1）酶量過高,。減少酶量；酶的質(zhì)量差,，調(diào)換另一來源的酶,。

（2）dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度,。

（3）MgCl2濃度過高,。可適當降低其用量,。

（4）模板量過多,。質(zhì)粒DNA的用量應<50ng，而基因組DNA則應<200ng,。

（5）引物濃度不夠優(yōu)化,。對引物進行梯度稀釋重復PCR反應。

（6）循環(huán)次數(shù)過多,；增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30,，縮短退火時間及延伸時間，或改用二種溫度的PCR循環(huán),。

（7）退火溫度過低,。

（8）電泳體系有問題：

①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大；

②凝膠沒有凝固好,；

③瓊脂糖質(zhì)量差,。

（9）若為PCR試劑盒則可能：

①由于運輸儲存不當引起試劑盒失效；

②試劑盒本身質(zhì)量有問題,，如引物選擇,、循環(huán)參數(shù)等選擇不當,。

（10）降解的陳舊模板擴增也易產(chǎn)生涂布。