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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>常溫細(xì)胞處理方式
細(xì)胞(Cells)是由英國(guó)科學(xué)家羅伯特·胡克(Robert Hooke,,1635~1703)于1665年發(fā)現(xiàn)的,。當(dāng)時(shí)他用自制的光學(xué)顯微鏡觀察軟木塞的薄切片,放大后發(fā)現(xiàn)一格一格的小空間,, [1] 就以英文的cell命名之,,而這個(gè)英文單字的意義本身就有小房間一格一格的用法,所以并非另創(chuàng)的字匯,。
當(dāng)收到了常溫的細(xì)胞,,正確的處理方式應(yīng)該是怎樣的。
一,、首先,,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。
二、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問(wèn)題,,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量叢瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)趨置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
三,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
四,、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài);建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。
五、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,,可正常傳代;若未超過(guò)80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5m左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松,。
六,、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離 心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細(xì)胞沉淀加入5m培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時(shí),,若細(xì)胞密度超過(guò)80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密,,度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作,。
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