在ELISA試劑盒中，進行各項試驗條件的挑選是很重要的,，其間包括:

（1） 固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不論何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一試驗條件下進行反響,，調(diào)查其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好,。

（2） 包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃ 18～24小時,。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后,，在其它試驗條件相同時,，調(diào)查陽性標本的OD值。挑選OD值大而蛋白量較少的濃度,。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml,。

（3） 酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定（見酶符號抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度）在正式試驗系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度,。

（4） 酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反響,，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)留意防護,。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體,。底物作用一段時刻后，應(yīng)參加強酸或強堿以終止反響,。通常底物作用時刻,，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前參加,。