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研域小課堂:關于細胞傳代方法您做對了嗎,?

時間:2019/9/5閱讀:1543
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經(jīng)過自主研發(fā)和兼并重組不斷擴展企業(yè)產(chǎn)品線,逐步發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務集成供應商,,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者,。在開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全,。

一:細胞與試劑方面:

1,、細胞(單層細胞,鏡檢合適)

2,、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細胞有要求的培養(yǎng)液)

3,、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

4,、7.5%NaHC03 溶液
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5,、0.25%胰蛋白酶

6,、 PBS 洗液。

二;試驗小用具方面:

1,、小方瓶(100m1)

2,、克氏瓶

3、膠塞

4,、吸管(10ml,、1m1)

5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

6,、C02 孵箱

7,、超凈臺

8、倒置顯微鏡

9,、4℃,、- 20℃冰箱
 
三:細胞傳代的操作過程

1、挑選細胞:鏡檢細胞,,挑選成長狀態(tài)杰出,,細胞界限清晰,具有立體感,,形狀好無污染,、無反常及可疑病變細胞。

2,、制造細胞培養(yǎng)液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),,參加滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml,。(僅供一般參考)。

3,、消化細胞:先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次,,每次10m1,棄去洗液,,向細胞瓶內(nèi)參加0.25%胰蛋白酶溶液,,每瓶1m1,細胞瓶平放,,使消化液*覆蓋細胞外表,。

4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶參加10m1 細胞培養(yǎng)液吹打渙散細胞,,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,,再參加10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。

5,、加塞,,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定),。

6,、填寫傳代記錄。

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