理論上運用*挑選的親和純化抗體可得到高特異性,，高敏感度的免疫測定,。但是,，由于經(jīng)濟原因或是缺乏適宜的試劑,，使得許多工作者采用低純度的制品,，這種試劑一般含有與試驗中其它成分起交叉反響的抗體。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在用抗人IgG抗血清的抗體時,，抗體中含有不需要的抗體交叉反響,。但當(dāng)運用親和純的抗血清時，交叉反響不明顯,。

研討任何ELISA系統(tǒng),，為了控制不需要的交叉反響，就要不吝運用親和純試劑,。運用抗IgG血清抗體作為包被抗體,，有時本底確實很低，但它的敏感度比僅運用親和純制品要低50-100倍,。在高敏感度的試驗中使用關(guān)閉試劑是很重要的,。zui終挑選非親和純抗IgG血清抗體是根據(jù)這樣設(shè)想：包被抗體或是結(jié)合的人IgG（抗原）與指示抗體有交叉反響，則過量的與指示抗體同種動物的血清,，就可以關(guān)閉與酶標(biāo)抗體的不要的結(jié)合,。但是人血清白蛋白中含有少數(shù)的IgA和IgG會干擾檢測。人血清白蛋白只適用于IgE的測定,。同樣,，不能用牛血清白蛋白。由于其間含有微量的牛IgG,。

抗血清抗體與親和純抗體對ELISA夾心法成果的影響可從下面試驗看出：

試驗A：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體,，指示抗體（檢抗）為粗制山羊抗人IgG抗體

試驗B：包被抗體為親和純的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體（檢抗）為粗制山羊抗人IgG抗體

試驗C：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體,，指示抗體為親和純的山羊抗人IgG抗體

試驗D：包被抗體和指示抗體都是親和純的兔抗人IgG抗體,。

試驗中運用5%血清（與指示抗體同物種來歷）進(jìn)行關(guān)閉，其他夾心法ELISA步驟相同。
                   
成果顯現(xiàn),，當(dāng)粗制的抗IgG血清抗體被用在夾心法的兩頭（如試驗a曲線）時,，本底很高且曲線坡度不明顯。雖然能成功使用此抗體類型,，但問題是一種抗體結(jié)合另一種抗體,。可能發(fā)生了山羊指示抗體結(jié)合了綿羊包被抗體,，由于稀釋液中的山羊血清過剩也不能下降本底值,。當(dāng)使用親和純化的包被抗體時（如試驗b曲線），本底恰當(dāng)下降而且形成了規(guī)范曲線,。但是,，大多數(shù)工作者認(rèn)為本底仍偏高，工作范圍有限（2-60ng/ml）,。當(dāng)親和純的指示抗體與粗制包被抗體聯(lián)合運用時（如試驗c曲線）,，本底大大較低，但敏感度約為100-200ng/ml,，再者工作范圍仍受限,。當(dāng)*運用親和純的抗體時（如試驗d曲線），本底低,，敏感度大大改進(jìn)且工作范圍廣（2-500ng/ml）,。