上海研域今天為您講述：樣品蛋白的提取和定量

方法一：采取Tris-丙酮法進行蛋白提取,，

     方法如下：

    （1）取0.5ɡ鮮葉放入用液氮預(yù)冷的研缽中,，加入適量液氮后迅速將其磨成粉末。

    （2）加入0.25ɡ水不溶性PVP,，加入4倍鮮葉體積即2ml蛋白提取緩沖液 充分研磨,。

    （3）4℃下45min，后離心（4℃,，15000g,15min）

    （4）取上清液加入2.5倍即5ml -20℃預(yù)冷的丙酮,，-20℃下靜置45min，之后同上離心,，取沉淀在-20℃下靜置揮去丙酮,。

    （5）加入1ml上樣液（12.5% ，0.5mol/L Tris-HCL PH6.8）,，沉淀充分溶解后,，同上離心，取上清液即為待測蛋白溶液,。

    方法二：

    取1～2g茶鮮葉加入等量PVPP和少量石英砂,，液氮研磨，加入pH 7.4的PBS緩沖液繼續(xù)研磨直至勻漿,，15000 g,、4℃離心15 min，上清液即為粗酶液,。

    粗酶液放于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。蛋白定量采用G-250法（Bradford法）進行。