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上海研域教您植物組織蛋白質(zhì)提取方法

時(shí)間:2018/12/5閱讀:1578
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植物蛋白是蛋白質(zhì)的一種,,來(lái)源是從植物里提取的,,營(yíng)養(yǎng)與動(dòng)物蛋白相仿,,但是更易于消化,。含植物蛋白豐富的是大豆,。但在飲食中,植物蛋白和動(dòng)物蛋白要搭配食用,。他們的提取方式有兩種,,如下:

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

1,、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,,可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入),,準(zhǔn)備提取液放在冰上。

2,、把樣品放在研缽中用液氮研磨,,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時(shí))。

3,、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4,、提取上清液,樣品制備完成,。

蛋白質(zhì)提取液:300ml1,、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3,、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g,。這種方法針對(duì)SDS-PAGE,垂直板電泳,。

二,、植物組織蛋白質(zhì)提取方法( 氯醋酸—丙酮沉淀法)

1、在液氮中研磨葉片

2,、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚,,然后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))棄上清。

3,、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),,搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí)),然后真空干燥沉淀,,備用,。

4、上樣前加入裂解液,,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,,然后離心(15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),,可臨時(shí)保存在4℃待用。

5,、用Brandford法定量蛋白,,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩K幤罚禾崛∫海汉?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮,。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),,使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對(duì)雙向電泳,,雜質(zhì)少,,離子濃度小的特點(diǎn),!當(dāng)然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會(huì)減少,。

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