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上海研域教您植物組織蛋白質(zhì)提取方法

時間:2018/12/5閱讀:1575
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植物蛋白是蛋白質(zhì)的一種,來源是從植物里提取的,,營養(yǎng)與動物蛋白相仿,,但是更易于消化。含植物蛋白豐富的是大豆,。但在飲食中,植物蛋白和動物蛋白要搭配食用,。他們的提取方式有兩種,,如下:

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

1,、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,,可根據(jù)材料不同適當加入),準備提取液放在冰上,。

2,、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時),。

3,、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清液,,樣品制備完成,。

蛋白質(zhì)提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2,、甘油(Glycerol)75ml3,、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g。這種方法針對SDS-PAGE,,垂直板電泳,。

二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法( 氯醋酸—丙酮沉淀法)

1,、在液氮中研磨葉片

2,、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清,。

3,、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),,然后真空干燥沉淀,,備用。

4,、上樣前加入裂解液,,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準),,可臨時保存在4℃待用,。

5、用Brandford法定量蛋白,,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆?。藥品:提取液:?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),,使用前再加入1M的DTT65ul/ml,。這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,,離子濃度小的特點,!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少,。

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