ELISA試劑盒生物學(xué)研討離不開定量。關(guān)于肯定定量,，一般需要使用已知濃度的分子制作規(guī)范曲線,。近來，研討人員介紹了一種新辦法,，能使用串聯(lián)質(zhì)譜儀對多個蛋白質(zhì)進行肯定定量,。
在MARQUIS辦法中，關(guān)于每個待定量的肽段,，研討人員建立重同位素符號的肽段,。他們以不一樣的量混合這些肽段，并在安排或細(xì)胞裂解后立即將一種混合物參加每個生物樣品中,。研討小組的負(fù)責(zé)人以為：“這是關(guān)鍵的一步,。你要盡早參加這些肽段，這么重同位素符號肽段和內(nèi)源肽段的丟失可一起發(fā)生,。
ELISA試劑盒隨后以同位素試劑符號樣品,，并參加質(zhì)譜儀中。每個肽段發(fā)生兩個峰：“重”峰代表組成的（加標(biāo)）肽段,，而“輕”峰代表內(nèi)源性蛋白,。經(jīng)過定量前者碎片化所發(fā)生的符號離子,，研討人員能發(fā)生每個肽段的規(guī)范曲線,。以后他們能測定對應(yīng)內(nèi)源性肽段的信號，斷定樣品中存在多少分子,。
研討小組使用MARQUIS定量了EGFR信號通路中的酪氨酸磷酸化,。在幾種配體影響以后，他們在多個時刻點定量了EGFR網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的磷酸化動力學(xué),，完成了EGFR磷酸化位點的定量對比,，并證明了關(guān)于每種配體，受體磷酸化在性質(zhì)上類似,，但數(shù)量上不一樣,。他們還培養(yǎng)了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤異種移植物,，并使用這種辦法定量了EGFR激酶按捺的效果。
據(jù)ELISA試劑盒介紹,，MARQUIS能一起定量10個樣品中多達(dá)100種肽段,。這只需要一臺串聯(lián)質(zhì)譜儀（如三重四級桿）、市售的同位素符號試劑,，以及重同位素符號的組成肽段,。每個人都能完成。咱們期望創(chuàng)建出一種適當(dāng)簡略的辦法,，而不需要什么竅門,。