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如何正確處理植物組織樣本

時(shí)間:2018/6/26閱讀:1728
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一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶(hù)可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境,。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱(chēng)重,,放入5ml的勻漿管中,。
2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,。
3、勻漿的方式:手工勻漿,,機(jī)器勻漿,。
①手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),,充分研碎,制成20%的勻漿液,。
②機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000轉(zhuǎn)/分上下研磨制成20%組織勻漿,,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長(zhǎng)勻漿時(shí)間),。
鏡檢觀(guān)察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞是否破碎,,若沒(méi)有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
4,、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,,取上清液進(jìn)行測(cè)定。
三,、樣本保存
植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定,,可立即低溫凍存,溫度越低越好,,中間如*凍融,,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測(cè)定可存5~7天等)

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