ELISA試劑盒途徑的挑選決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素,、酶,、毒素等生物學活性抗原，通常不宜選用靜脈打針,。
不一樣個別對共同抗原的反響性不一樣,，并且不一樣抗原發(fā)生免疫反響的才能也有強有弱，因而常常在打針抗原的一起,，參加能增強抗原的抗原性物質(zhì),，以影響機體發(fā)生較強的免疫反響，這種物質(zhì)稱為免疫佐劑,。
免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨,，均勻后再邊磨邊滴參加等容積抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加）,，加完后再承繼研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內(nèi)*不渙散中止,。
穿插反響率低,，標明抗血清的特異性好，反之則特異性差,。
搜集的血液置于室溫下1h分配,，凝集后，置4℃下,，過夜（切勿冰凍）分出血清,，離心，4000rpm,，10min,。
取兔血有兩種辦法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血,，二是頸動脈入血,，也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑,，初度免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml,，加強免疫時不用打針百日咳疫苗。
在無菌條件,，吸出血清,，分裝（0.05～0.2ml）,，貯于-40℃以下冰箱，或凍干后儲存,。
取動脈或靜脈放血時,，將兔放入一個特造的木匣或籠內(nèi)，耳露于箱（籠）外,，也可由另一人抓住兔身,。
防止扔掉抗原，亦可用一打針器裝抗原液,，另一打針器裝佐劑,，二者以聚乙烯塑料管聯(lián)接，然后二者往復重復抽吸,，約數(shù)十分鐘后即能*乳化,。
每2～3周加強免疫一次。
制作辦法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),，用超聲波使之混勻，高壓滅菌,，置4℃下保存?zhèn)溆谩?br />ELISA試劑盒特異性是以穿插反響率來標明的,。
ELISA試劑盒穿插反響率通常是用競賽按捺曲線來斷定的。
若用兔,，用純種新西蘭兔,，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜,。
家兔是zui常用以發(fā)生抗體的動物,，因而這兒首要議論兔血的搜集。
頸動脈放血時,，將兔仰臥,，固定于兔臺，剪去頸部的毛,，切開肌膚,，暴露頸動脈，插管,，放血,。
不一樣濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)別離做競賽按捺曲線，核算各自的聯(lián)絡率（B/T或B/B0）,，求出各清閑IC50時的濃度,，按下列公式核算穿插反響率。二禮拜后,，可在另一耳放血,。
此法可重復屢次放血,。
作免疫用的動物有哺乳類和禽類，首要為羊,、馬,、家兔、猴,、豬,、豚鼠、雞等,，試驗室常用者為家兔,、山羊和豚鼠等。
在第2次加強免疫后2周,，從耳緣靜脈取2～3ml血,，制備血清，查看抗體效價,。羊等較大動物以頸靜脈,、動脈取血，鼠等小動物取血可參看有關資料,。
剪去耳緣的毛,，用少量二甲苯涂抹耳廓，30s后,，耳血管擴大,、充血。用手輕拉耳尖,，以單面剃須刀或尖的手術刀片,，靈敏切開動脈或靜脈，血液即流出,，每次可搜集30～40ml,。
抗原劑量，初度劑量為300～500μg,，加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4分配,。
C冰箱保存。查看合格后即以其中一打針器作打針用,。
佐劑除了延伸抗原在體內(nèi)的存留時間,，添加抗原影響作用外，更首要的是,，它能影響網(wǎng)狀內(nèi)皮體系,，使介入免疫反響的免疫活性細胞增多，推動T細胞與B細胞的彼此作用，然后增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的發(fā)生,。
ELISA試劑盒未到達預期效價,，需再進行加強免疫，直到滿意時中止,。