很多實驗新手剛剛做酶聯(lián)免疫試驗,，都會有很多不了解的方面，上海勁馬將是您身邊的實驗好幫手,。今天,，小編在這里要和大家分享下如何運(yùn)用酶標(biāo)記抗體法染色。
酶標(biāo)記抗體法的實驗原理總體來說和熒光素標(biāo)記抗體法的原理類似,，分為直接法和間接法,，其原理基本相同，但敏感性不同,。
一,、直接法
直接法是將酶（如HRP）標(biāo)記在特異性抗體（*抗體）上,，然后用酶標(biāo)記抗體直接與相應(yīng)原特異性結(jié)合，形成抗原—抗體—HRP復(fù)合物,，zui后用酶底物DAB-H202顯色,。該法的優(yōu)點是簡單、步驟少,，省時,、特異性高,、非特異性染色輕：缺點是敏感性差,，因為一個抗原決定簇只結(jié)合一個HRP分子（假設(shè)一個抗體分子與一個HRP分子結(jié)合）。另外,，一種標(biāo)記抗體也只能檢測一種抗原,。若要檢測多種抗原，就必須標(biāo)記每一種特異抗體,，這樣既麻煩又不經(jīng)濟(jì),。目前此法很少應(yīng)用，但在單克隆抗體制備過程中,，為了更特異地篩選單抗,，仍常用此法。
二,、間接法
間接法也稱夾心法,，是直接法的簡單改進(jìn)，將酶示蹤物標(biāo)記在二抗上,，再與*抗體（已與相應(yīng)抗原反應(yīng)形成復(fù)合物的IgG）反應(yīng),，然后進(jìn)行顯色反應(yīng)。此法要求第二抗體與特異性抗體（一抗）應(yīng)是不同種屬的動物產(chǎn)生,，如特異性抗體（一抗）是兔抗人IgG,，酶標(biāo)記抗體（二抗）則可以是羊抗兔抗體。
間接法與直接法比較有以下優(yōu)點：
1,、應(yīng)用面較寬,，僅標(biāo)記一種二抗就可以檢測眾多相同的*抗體，例如眾多一抗為兔來源,，只要標(biāo)記一種抗兔二抗就可用于所有抗兔一抗的檢測,，不需要對每種特異性抗體進(jìn)行標(biāo)記；
2,、敏感性增加,，*抗體的工作濃度在直接法的基礎(chǔ)上進(jìn)一步稀釋；
3,、可以商品化購置,；
4,、可以設(shè)計各種對照。