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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
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ELISA試劑盒使用方法講解

時(shí)間:2016/12/12閱讀:2077
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公司出產(chǎn)的ELISA試劑盒敏感性高,,特異性強(qiáng),,重復(fù)性好。試劑盒中試劑安穩(wěn),、易保留,,操作簡(jiǎn)潔,成果判斷較客觀等要素,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各領(lǐng)域中,,檢查意圖:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本,。合適檢查包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、灌洗液、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、安排勻漿等標(biāo)本。
ELISA試劑盒使用方法一
雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,,4℃ 。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡(jiǎn)稱洗刷,,下同)。
2. 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,,置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗刷,。(一起做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔),。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反響孔中,,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),,洗刷,。
4. 加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘,。
5. 停止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml,。
6. 成果判定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,,陽性程度越強(qiáng),,陰性反響為無色或極淺,依據(jù)所呈色彩的深淺,,以“+",、“-"號(hào)表明。也可測(cè)OD值:在ELISA檢查儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,,即為陽性。
ELISA試劑盒使用方法二
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,,4℃;
2.次日洗刷3次,;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷,;
4.(一起做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反響孔中,,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗刷,;
6.’zui終一遍用DDW洗刷,。
ELISA試劑盒其他步驟同“雙抗體夾心法"的4、5,、6,。

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