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由鱟試驗的反應(yīng)機理我們可以知道:內(nèi)毒素在二價陽離子參與下,作用凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生一系列生化反應(yīng),最后形成凝膠,。因此,一切阻礙反應(yīng)機制的因素,,均干擾凝膠的形成,,形成假陰性結(jié)果,作為干擾凝集反應(yīng)的物質(zhì)主要有:人血中的多種凝血因子,、很多中藥成分,、某些生化藥品、抗生素,、可使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì),、高糖溶液、絡(luò)合物等等,,此外樣品的pH值,,反應(yīng)溫度等也都有一定的影響(表2)。
另外一些金屬離子(如 Fe,、Al,、Ca)會對細菌內(nèi)毒素活性產(chǎn)生影響,從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,,因此在實驗時,,避免使用一些金屬用具,,而使用玻璃用具。
關(guān)于供試品中自身成分的影響,,可以說是鱟試驗中影響因素最大的,,作為供試品,既有對LAL或TAL試劑的活性產(chǎn)生影響的因素,,也有對細菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響因素,,因此在實際測定時要引起注意。
(1)供試品對鱟試劑的活性產(chǎn)生影響的因素為:蛋白酶,、蛋白酶抑制作用,,螯合劑、蛋白變性劑等,。
(2)供試品對細菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響的因素:金屬離子(鐵,、鋁、鍺等),,表面活性劑等,。
(3)對主反應(yīng)以外的測定系統(tǒng)產(chǎn)生影響的場合:濁度、顏色,、磺胺制劑(合成基質(zhì)化的偶氮化反應(yīng)時)等,。
在這些共存物質(zhì)的影響當中,特別要引起注意的是些外界金屬離子的影響,,尤其是在舊菌內(nèi)毒素標準品的溶解及稀釋過程中一定特別注意金屬離子的混入,,最-好的方法是使用玻璃制備的蓋子。
對于大多數(shù)的注射劑一般在原液時均存在干擾作用,,然而當把樣品用水進行稀釋后即可排除干擾,,而對于稀釋法不能排除干擾的樣品,可考慮用其他方法給予解決,。如:中和法,、過濾法以及透析方法等,目前市場上見到鱟試劑主要為TAL試劑和LAL試劑,。因為工藝不同,,抗干擾能力的強弱不一,因此對同一樣品,、使用不同廠家的LAL試劑所出現(xiàn)的最大無干擾濃度是不同的,,這一點要引起注意。另外,,TAL試劑和LAL試劑是否完-全等活性關(guān)系還有待進一步研究和探討,。
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