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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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細(xì)菌內(nèi)毒素(脂多糖)的的純化

時(shí)間:2022/9/13閱讀:1169
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脂多糖Lipopoly saccharide,,LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分,,脂多糖對(duì)宿主是有毒性的,。脂多糖只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來(lái),,所以叫做內(nèi)毒素,。

 

三氯醋酸法(Trichloroacetic AcidTCA),、酚水法,、苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP)、DMSO,、高壓超聲處理法所提取的LPS或多或少受到蛋白質(zhì),、核酸及多糖的污染,故需作一定的純化,。LPS的純化方法目前最-常用的為超速離心(4萬(wàn)轉(zhuǎn)×4小時(shí),,共三次),,在這一條件下,LPS可沉淀下去,,而蛋白質(zhì),、核酸及多糖則保留在上清液中,去除上清液即可得到較為純化的LPS,。

 

 

但是這一方法需時(shí)較長(zhǎng),且質(zhì)量過(guò)關(guān)的超速離心機(jī)目前在國(guó)內(nèi)亦不十分普及,,故而難以推廣應(yīng)用,。我們?cè)趯?shí)際工作中體會(huì)到,用任何方法提取的LPS,,可再以PCP純化一次(140ml/g LPS,,然后只需一次超離,即可取得高度純化的LPS,。

 

提取的LPS除可被蛋白質(zhì),、核酸及多糖污染外,還可被一些小分子物質(zhì),,如多胺,、陽(yáng)離子Ca++Mg++,、K+的污染,。通過(guò)電透析可將這類(lèi)小分子物質(zhì)除去。此時(shí)形成的LPS為酸性LPS(由LPS中類(lèi)脂A上的磷酸基團(tuán)形成的),。應(yīng)用堿中和LPS,,可變成LPS的鹽。如用NaOH中和則可變成LPS鈉鹽,,而應(yīng)用三乙基乙胺則可變成LPS三乙胺鹽,、后者極易溶解于水,已廣泛地應(yīng)用于生物學(xué)研究,。

 

綜上所述,,LPS取方法較多,應(yīng)當(dāng)根據(jù)菌種和實(shí)驗(yàn)條件而選用合適方法,。PCP法對(duì)R型菌尤顯長(zhǎng)處,,高壓超聲法雖可用于SR但方法步驟繁雜,;DMSO法與TCA法已很少用到,;而酚水法無(wú)論產(chǎn)量,純度及物理性質(zhì)均較滿意的,,不失為一個(gè)實(shí)用的方法,。LPS純化目前一般采用PCP法及一次超速離心,,應(yīng)用該法可使LPS污染物包括蛋白質(zhì)、核酸及多糖除去,,而應(yīng)用片透析方法,,則可除去LPS中的小分子物質(zhì)如多胺、二價(jià)陽(yáng)離子,,從而可得LPS轉(zhuǎn)化成實(shí)驗(yàn)需要的鹽類(lèi),。

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