在腫瘤治療領(lǐng)域,，化療作為一種傳統(tǒng)和重要的治療手段，主要是通過化學(xué)藥物殺滅腫瘤細(xì)胞達(dá)到治療的目的,。然而,，由于其非特異性的殺傷作用引起的不良反應(yīng)一直是患者和醫(yī)療人員的難題。隨著基因靶點(diǎn)研究的不斷深入,，腫瘤治療的靶向藥物應(yīng)運(yùn)而生,，目標(biāo)明確的治療方式給患者帶來更好治療效果的同時(shí)也表現(xiàn)出更輕的藥物副反應(yīng)，因此在臨床上獲得更廣泛的應(yīng)用場景,。替尼類藥物就是典型的靶向藥物代表之一,，在非小細(xì)胞肺癌、淋巴癌,、其他各種實(shí)體瘤的治療中作用顯著,，臨床上對替尼類藥物血漿分析也對個(gè)性化用藥及精準(zhǔn)治療具有重要參考意義,。
化合物信息
| 名稱 | CAS 號(hào) | 分子量 |
| 阿法替尼 | 850140-72-6 | 485.9 |
| 阿福替尼 | 1869057-83-9 | 568.6 |
| 阿萊替尼鹽酸鹽 | 1256589-74-8 | 519.1 |
| 阿美替尼 | 1899921-05-1 | 525.6 |
| 貝福替尼 | 1835667-63-4 | 567.6 |
| 伊馬替尼 | 152459-95-5 | 493.6 |
| 勞拉替尼 | 1454846-35-5 | 406.4 |
| 奧希替尼 | 1421373-65-0 | 499.6 |
| 吡咯替尼 | 1269662-73-8 | 583.1 |
實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，對血漿基質(zhì)來說,，部分初代替尼化合物如伊馬替尼,，可以通過蛋白沉淀的方法直接進(jìn)行分析。但對于三代替尼類藥物蛋白沉淀方法的回收率較低,，很可能無法滿足分析需求,，因此我們開發(fā)了基于 SPE 的前處理方法進(jìn)行分析，具體方案如下,。
前處理
預(yù)處理：
200 µL 血漿加入 200 µL 5% 甲酸水溶液,，渦旋，待凈化,；
活化：
96 孔板依次使用 200 µL 甲醇,、200 µL 水活化；
上樣：
加載預(yù)處理后的血漿至活化后微孔板,；
淋洗：
650 µL 水溶液淋洗微孔板,；
洗脫：
用 100 µL 2% 氨水甲醇溶液洗脫 2 次，渦旋混合,；
氮干復(fù)溶：
40 ℃ 氮?dú)飧稍锖?，加?200 µL 初始比例流動(dòng)相渦旋混合，待檢測,。
分析
色譜條件
色譜柱：Kinetex C18 (2.1×50 mm, 1.7 μm, 100 ?); P/N: 00B-4475-AN
流動(dòng)相 A 相：5mM 甲酸銨 - 0.1% 甲酸水溶液
流動(dòng)相 B 相：0.1% 甲酸甲醇溶液
流速：0.5 mL/min
柱溫：40 ℃
進(jìn)樣量：5 μL
梯度程序見下表：
| 時(shí)間 (min) | 流速 (mL/min) | B (%) |
| 0 | 0.5 | 20 |
| 0.5 | 0.5 | 40 |
| 2.8 | 0.5 | 70 |
| 3.0 | 0.5 | 100 |
| 4.0 | 0.5 | 100 |
| 4.5 | 0.5 | 20 |
| 6.0 | 0.5 | 20 |
質(zhì)譜條件
離子源類型：電噴霧離子源（ESI+）
掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測正負(fù)離子模式（MRM）
噴霧針電壓：5500 V
離子源溫度：500 ℃
加熱器（GS1）：60 psi
輔助加熱氣（GS2）：60 psi
氣簾氣（CUR）：40 psi
碰撞氣（CAD）：10 psi
結(jié)果（藥物譜圖未能有效呈現(xiàn)）
加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
| 名稱 | 加標(biāo)濃度 ppb | 相對回收% | RSD(N=6) | 基質(zhì)效應(yīng)% |
| 阿法替尼 | 10 | 82.3 | 3.7 | +38.3 |
| 阿福替尼 | 6.25 | 56.5 | 3.9 | +2.76 |
| 阿萊替尼鹽酸鹽 | 5 | 81.5 | 3.5 | +19.1 |
| 阿美替尼 | 12.5 | 72.7 | 4.6 | -7.1 |
| 貝福替尼 | 25 | 63.5 | 3.1 | +7.5 |
| 伊馬替尼 | 10 | 82.3 | 3.4 | -0.7 |
| 勞拉替尼 | 10 | 87.9 | 4.6 | +40.1 |
| 奧希替尼 | 10 | 72.3 | 8.4 | -2.7 |
| 吡咯替尼 | 5 | 87.0 | 8.2 | +8.6 |
產(chǎn)品
| 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| PCX 96-Wellplate | 5mg/1mL/well, 2/Pk | CX00501-MW |
| Kinetex C18 | 2.1×50 mm,1.7 μm, 100 ? | 00B-4475-AN |
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