【飛諾美色譜】擁有良好的分離度是每一個(gè)色譜工作者都?jí)裘乱郧蟮氖虑椋@里我們會(huì)詳細(xì)介紹分離度基本要素在方法開發(fā)過(guò)程中的重要性以及與分離方程之間關(guān)聯(lián)性,。相信這對(duì)新手和有經(jīng)驗(yàn)的色譜工作者都很有用,。
分離方程被認(rèn)為有三個(gè)項(xiàng)，它們各自反映了你的方法的柱效,、選擇性和保留度,。柱效對(duì)于在轉(zhuǎn)移到較短的色譜柱時(shí)保持方法的分離度至關(guān)重要。
下面是兩個(gè)GC分析色譜圖,。我們可以發(fā)現(xiàn),，較短的色譜柱對(duì)色譜柱的選擇性和容量的影響可以忽略不計(jì)，在這兩個(gè)色譜圖中,，內(nèi)徑（ID）和薄膜厚度保持不變,。表1列出了我們應(yīng)該注意的變量。
表 1 – 分離度變量
tR=保留時(shí)間
t0=“色譜柱容積"或“死體積"時(shí)間
t’=調(diào)整后的保留時(shí)間（取決于色譜柱容積）
α=選擇性（兩個(gè)峰的峰尖之間的關(guān)系）
k=容量因子（相對(duì)于固定相和方法條件的固有保留）
N=理論塔板（代表分析物與固定相之間的相互作用）
這兩個(gè)色譜圖代表了在使用新柱（長(zhǎng)度正好是原始柱的一半）時(shí)保留時(shí)間和柱容積的比例效應(yīng),。最終的效果是,，我們的分離方程中的“選擇性"項(xiàng)和“保留度"項(xiàng)保持不變，其數(shù)學(xué)結(jié)果如表2所示。
表2 – 選擇性和保留度的對(duì)比
使用較短的色譜柱實(shí)際上會(huì)減少可用的理論塔板的數(shù)量,，因?yàn)樵谳^短的色譜柱上分析物與固定相相互作用的機(jī)會(huì)更少,。這在第二張色譜圖中得到了證明，盡管在洗脫過(guò)程中,，這些峰仍然能保持一定的峰形,，但峰與峰之間的分離度降低了。
但如果在保持相比的情況下減小內(nèi)徑和薄膜厚度,，從而提高柱效率（N）,，最終可以使我們的分離度恢復(fù)到原始方法的值。較窄的內(nèi)徑將增加分析物與固定相之間的相互作用頻率,，而較薄的薄膜將增加分析物進(jìn)出固定相時(shí)的傳質(zhì)速率,。在第三張色譜圖中，內(nèi)徑和薄膜厚度被減小,，使得兩個(gè)分析物的峰更尖銳,，兩個(gè)峰之間的分離度也就更高。
柱效（N）代表峰的尖銳度和分析物與固定相之間相互作用的機(jī)會(huì),。柱效的計(jì)算考慮了峰的寬度和峰的保留時(shí)間,。早期洗脫的峰通常具有較窄的寬度，顯示出其較高的柱效并可以提高該峰與相鄰分析物的分離度,。
一半高度（W1/2）處的峰寬即一半高度處的實(shí)際寬度
GC和LC中都有一些技巧可以在縮短色譜柱的同時(shí)保持效率,。在GC（氣相色譜）中，你可以保持相比的同時(shí),，減小內(nèi)徑和薄膜厚度,，以增加分析物和固定相之間的相互作用的頻率和速度。在LC （液相色譜）中,，更小的顆粒增加了相互作用的頻率,，同時(shí)也增加了分析物進(jìn)出顆粒以及相關(guān)固定相的速度。
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