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產(chǎn)品分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存條件  4℃,6個(gè)月

用途  細(xì)胞培養(yǎng)的添加劑,尤其適用于干細(xì)胞培養(yǎng)

注意事項(xiàng)  經(jīng)無菌處理。

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示,，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。

2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈,，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來水、純水洗凈,，烘干,、冷卻。

2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿。

3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻,。

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量,，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液,。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱,；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃,；檢測(cè)器溫度250℃,；分流進(jìn)樣，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000,。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存,，在第1、3,、7,、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量,。記錄下來,，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%,，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

骨粘連蛋白(ON)ON ELISA Kitβ淀粉樣肽（1-28）抗體包裝5g

骨形成蛋白6(BMP-6)BMP-6 ELISA Kit有絲分裂激B抗體包裝5g

骨形成蛋白(BMPs)BMPs ELISA Kit軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g

骨涎蛋白(BSP)BSP ELISA Kit去整合樣金屬蛋白10抗體包裝5g

骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)CTX-2 ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg

骨特異性堿性磷B(ALP-B)ALP-B ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml

骨特性堿性磷(BALP)BALP ELISA Kit植物生長激ABP1抗體包裝25ml

骨橋(OPN)OPN ELISA Kit肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體包裝5ml

骨膠原交聯(lián)(Cr)Cr ELISA Kitα紅分化相關(guān)因子抗體包裝1g

骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)OT/BGP ELISA Kit血管緊張激活蛋白1抗體包裝5g

骨鈣(OT)OT ELISA KitAlpha清蛋白抗體包裝1g

骨鈣(BGP)BGP ELISA KitAFAP1L2抗體包裝1g

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)BMPR-Ⅱ ELISA Kit神經(jīng)分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體包裝5MG

骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)BMPR-1A ELISA Kit粘合連接相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

骨成型蛋白9(BMP-9)BMP-9 ELISA Kit去整合樣金屬蛋白13抗體包裝5g

脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)Fluticasone Propionate is a synthetic glucocorticoid, used to treat non-allergic
丙酮酸鈉溶液CXCL4/PF-4/FITC  熒光標(biāo)記血小板因子4IgG環(huán)戊烷 ,，>99.0% (GC)

CXCL5/ENA-78/FITC  熒光標(biāo)記上皮中性?；罨?8IgG環(huán)戊烷 98%（GC)

GCP-2/CXCL6 /FITC  熒光標(biāo)記抗粒趨化蛋白2IgG環(huán)戊烷 for HPLC，農(nóng)殘級(jí),，≥75% (GC)

CXCL7/NAP-2/PPBP/FITC  熒光標(biāo)記中性粒趨化蛋白2IgG木質(zhì)磺鈣 96%

CXCL9/MIG/CMK/FITC  熒光標(biāo)記γ干擾誘導(dǎo)單核因子IgG環(huán)己硫  98%

CXCL/IP- /FITC  熒光標(biāo)記CXCL趨化因子/干擾誘導(dǎo)蛋白IgG鄰苯二 AR,99.0%

CXCL11/ITAC/FITC  熒光標(biāo)記干擾誘導(dǎo)T趨化因子IgG正癸烷 standard for GC, ≥99.5% (GC)

SDF-1/CXCL12 /FITC  熒光標(biāo)記質(zhì)衍生因子－1IgG正癸烷 99%

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線,，來確定最佳篩選濃度,。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度,。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過夜,；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞,，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50,，100,，250，500,，750，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型,，轉(zhuǎn)染,，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。