胰島素（大鼠超敏）ELISA檢測試劑盒

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【樣品要求】

胰島素elisa檢測試劑盒(大鼠)可使用血清也可使用血漿作為樣品。

不能使用明顯溶血﹑黃疸和脂血的樣品,。

血清：靜脈穿刺采集全血,，待其凝血，在室溫下離心分離血清,。

血漿：將全血采集到含有抗凝劑的離心管,，采集后立即離心分離。

樣品的儲存

樣品蓋好蓋子后,，可在實驗前2-8℃下儲存5天,，要更長時間儲存，應(yīng)在-20℃下凍存,。在開始實驗前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品,。

樣品的稀釋

在第一次實驗中，要是樣品的濃度高于最高標準品,，則樣品應(yīng)用按實驗步驟所描述的10倍或100倍稀釋,。在計算濃度時需乘以此稀釋度。

例子：

a） 按1：10稀釋： 10μL的血清+90μL的零標準品（充分搖勻）,。

b） 按1：100釋?。?/span>10μL按a）稀釋的血清+90μL的零標準品（充分搖勻）

檢測步驟

所有的標準品、質(zhì)控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有微孔的檢測條件都一樣,。

1）將所需數(shù)目的板條置于板架上,。。

2）用一次性吸嘴將標準品﹑質(zhì)控品和樣品分別25μL加入相應(yīng)的檢測孔中,。

3）每孔加入25μL的酶聯(lián)物,。

4）充分混合10秒，在此步驟中充分混合非常重要,。

5）室溫下溫育30分鐘,。

6）快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次,，在吸水紙上拍干以除去殘余液體,。注意：洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和精確度。

7）每孔加入50μL的酶復(fù)合物,。

8）在室溫下溫育30分鐘,。

9）快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次,，在吸水紙上拍干以除去殘余液體,。

10）每孔加入50μL的底物液。

11）在室溫下溫育15分鐘,。

12）每孔加入50μL的終止液終止反應(yīng),。

13）在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值,。

【結(jié)果計算】

1) 計算標準品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光度。

2) 以吸光率為Y軸,，濃度為X軸,，按照從標準品中獲得的平均吸光率和其相對應(yīng)的濃度值，繪制一條標準曲線,。

3) 利用樣品的平均吸光率,，在標準曲線上得出其相應(yīng)的濃度值，

4) 自動方法：使用計算機三次方模式﹑四參數(shù)模式或雙對數(shù)函數(shù)的計算機程序可得到結(jié)果,。

5) 樣品的濃度可從標準曲線上直接獲取。樣品的濃度高于最高標準品的濃度則需進一步稀釋,。在計算濃度的時候,，要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

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