人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒說(shuō)明書（定量）

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)檢測(cè)試劑盒（ELISA）

英文名稱：Human（Aβ42）ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，定量檢測(cè)血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等相關(guān)樣本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)的濃度。

【檢測(cè)原理】

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)水平,。用純化的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人β淀粉樣蛋白42(Aβ42),，再與HRP標(biāo)記的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)濃度。

【試劑盒組成】

注意：使用前請(qǐng)檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致

需要但未提供的材料及耗材

  1,、酶標(biāo)儀

2,、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4,、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5,、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7,、無(wú)粉一次性乳膠手套

【儲(chǔ)存條件及有效期】

  1、2-8℃保存,，切勿冷凍,，有效期6個(gè)月。

  2,、開(kāi)封使用后,，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱,。

【適用儀器】

  半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀,。

【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè),。

細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注意：檢測(cè)前，樣本中可見(jiàn)的沉淀必須去除,。不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本,。 樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃，以避免人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)活性的丟失,。如果在 24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè),，樣本可以 存放在 2 - 8℃,。 避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測(cè)前,，冷凍樣本應(yīng)該緩慢地恢復(fù)至室溫,，輕柔地混勻。

2.樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存72h,，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后,，不是一次檢測(cè)完,，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融,，使用時(shí)在室溫下解凍,，確保樣品均勻充分解凍。

【人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒操作步驟】

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
• 溫育：操作同3,。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

【操作程序總結(jié)】

【結(jié)果計(jì)算】

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1,、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明,、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,，無(wú)破損漏氣,。

2、劑量反應(yīng)曲線線性

標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,，大于等于0.9900,。

3、精密度

批內(nèi)精密度：三組已知的高,、中,、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估,。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%,。

批間精密度：三組已知的高、中,、低濃度樣品,，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批間變異系數(shù)CV%小于15%,。

4,、檢測(cè)范圍

6μg/L -160μg/L 。

5,、靈敏度

低檢出劑量小于1.5μg/L,。

6,、回收率

三組已知的高、中,、低濃度樣品,，進(jìn)行五次回收率評(píng)估，回收率在85%-115%之間,。

7,、特異性

本試劑盒識(shí)別天然和重組人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)，與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉,。

8,、穩(wěn)定性

2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月,。

【注意事項(xiàng)】

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間Best控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

• 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，Best做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔First孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

【常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法】

若實(shí)驗(yàn)效果不好,，請(qǐng)及時(shí)對(duì)顯色結(jié)果拍照，保存實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),，保留所用板條及未使用試劑,，然后 聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問(wèn)題,。同時(shí)您也可以參考以下資料：

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

地    址：上海市閔行區(qū)閔北路88弄1-17號(hào)、18-30號(hào)第12幢168室