一,、產(chǎn)品應用

      ND-2000是目前國內(nèi)外實驗室中使用的一款微量分光光度計,，其*的性能,、準確的結(jié)果贏得了廣大用戶的好評。

      該產(chǎn)品可用于以下幾個方面：

* 紫外檢測：常規(guī)紫外光波長下檢測樣品吸光值,；

* 核酸檢測：可檢測dsDNA,、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm,、280nm處的吸光值,；

* 探針檢測：檢測熒光標記探針的吸光值,，可用于去除未能標記探針的樣品；

* 細胞培養(yǎng)物檢測：檢測細胞培養(yǎng)物在600nm處的吸光值,；

* 蛋白檢測：檢測普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值,；

* 蛋白標記檢測：可檢測被BCA、Bradford或Lowry標定的蛋白樣品,，自動畫出標準曲線并計算出待測蛋白質(zhì)濃度,。

二、 產(chǎn)品簡介
     NanoDrop 2000超微量分光光度計是NanoDrop的產(chǎn)品,，應用液體的表面張力特性,，樣品體積只需要 0.5~2ul,，在檢測臺上,，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量,、高濃度,、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優(yōu)點,。此產(chǎn)品設計受保護，并在*廣受歡迎,，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究,。

      NanoDrop 2000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測,，且不需要暖機，開機后立即使用,。搭配高感度CCD array檢測器，檢測吸收值可高達300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul）,，大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測,。

       待測樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的zui高要求，一般核酸,、蛋白質(zhì)樣品能在檢測前以vortex mixer震勻為*,，若無vortex mixer也應以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂,，則改以55?C加熱約一分鐘,，使樣品在偵測前呈現(xiàn)均勻狀態(tài),，以確保 2ul 具有代表性。

      檢測時選擇不同檢測模式,，可以得到zui快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜,、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio,、260/230 ratio及核酸濃度,。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）,、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度,。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計算,。

● BCA,、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果，自動畫出標準曲線并計算R square,，待測蛋白質(zhì)濃度,。

* 蛋白質(zhì)檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,，因呈色劑隨時間會逐漸加深,，使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標準品，在*時間內(nèi)完成檢測,，以得到良好的標準曲線,。每個標準曲線zui多可有七個標準品，每個標準品zui多可做五重復,。

* 測蛋白質(zhì)時樣品體積需使用 2ul,，每個樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留,。觀看影片,。

濃度范圍：

三,、技術參數(shù)：   

1,、波長范圍: 190-840nm；   

2,、波長精度: 1nm,；   

3、分辨率: <1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）,；   

4,、其它: 1mm光程長度（可自動調(diào)整到0.05mm）；   

5,、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）,；   

6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）,；   

7,、吸光率精確度：0.002 absorbance （1mm光程）；   

8,、吸光率準確性：2%（at 0.76 at 257 nm）,；    

9、吸光率范圍：0.02-300 （相當于10mm光程）,；   

10,、核酸檢測周期：< 5s；   

11,、體積：14cm×20cm,。

四、使用方法舉例：

dsDNA：在主畫面點選Nucleic Acid,，計算機與儀器自動完成聯(lián)機,。依照DNA所溶于之液體準備該溶液（務必確認DNA溶于二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點在偵測臺上,，放下上臂后再按Blank,。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱,，將樣品混勻,，取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再按Measure,。

五,、結(jié)果整理：

 NanoDrop2000 軟件在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會存在上一個使用者的檔案內(nèi),。

六,、注意事項：

1. 偵測后立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走,，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內(nèi)部,，折迭四次后以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）,。

2. 同一滴液體只能做一次偵測,，欲重復定量同一樣品，請擦掉前一滴,，重新取出一滴進行偵測,。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求,，原則上不超過 2ul,。并請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性,，務必使用2ul進行偵測,。

4. 當軟件跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀并依指示進行障礙排除,。zui常發(fā)生的情形是在偵測過程液柱并未正確形成,，軟件會出現(xiàn)以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下臺面,，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后,，擦掉該滴樣品,，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至2ul,。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid （HF）之腐蝕樣品,，其它無腐蝕性之液體皆可使用。

七,、日常與定期維護：

* 平時保持臺面及儀器本身清潔,。

* 定期校正。

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