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可見分光光度計是分析化學和生物實驗中常用的精密儀器,，用于測定溶液中物質(zhì)的光吸收特性，從而推導濃度或化學性質(zhì),。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A = εlc),，即吸光度與溶液濃度、光程長度及摩爾吸光系數(shù)成正比,。為確保測量準確性和儀器穩(wěn)定性,，需嚴格遵循以下操作細節(jié)：
一、前期準備與儀器檢查
1. 環(huán)境要求
- 儀器需放置在平穩(wěn)臺面,，避免震動和強光直射,。
- 室溫應(yīng)保持恒定(20-25℃)，濕度控制在40%-60%,，防止光學元件受潮或結(jié)露,。
- 電源電壓需穩(wěn)定，建議配備穩(wěn)壓電源或UPS,，避免電壓波動影響檢測器靈敏度,。
2. 儀器自檢
- 開機前檢查樣品室是否清潔，無殘留液體或灰塵,。
- 確認氘燈(或鎢燈)壽命,，若光源強度不足(如透光率偏差>10%)，需及時更換,。
- 檢查波長校準：用汞燈或鈥玻璃濾光片校正波長準確性(允許誤差±1 nm),。
二、操作流程與關(guān)鍵步驟
1. 開機預熱與初始化
- 開啟電源后預熱15-30分鐘,，使光源,、單色器及檢測器達到熱平衡。
- 初始化儀器：選擇可見光波段(380-780 nm),，設(shè)置掃描模式或固定波長模式,。
2. 參比溶液的制備與校準
- 參比液選擇：通常為溶劑(如蒸餾水、緩沖液),，需與待測樣品基質(zhì)一致,。
- 校準操作：
- 將參比液倒入1 cm比色皿，用擦鏡紙擦拭外壁至透明,。
- 放入樣品室,，關(guān)閉蓋板，調(diào)零透光率(T%=100%)或吸光度(A=0),。
- 若測量波長超出參比液適用范圍(如色素干擾),，需采用空氣校準或二次參比法,。
3. 樣品測量與數(shù)據(jù)記錄
- 比色皿使用規(guī)范：
- 選擇匹配的石英或玻璃比色皿(光學面潔凈，無劃痕),。
- 倒入樣品時沿壁緩慢添加,，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡,，用軟紙巾輕拭排出,。
- 測量高濃度樣品時，可稀釋后測試,，防止吸光度超出線性范圍(A=0.2-1.0為佳),。
- 數(shù)據(jù)讀取：
- 固定波長下直接讀取吸光度(A)或透光率(T%),，連續(xù)測量3次取平均值,。
- 若需全波長掃描，設(shè)置適當狹縫寬度(通常1-2 nm),，觀察特征吸收峰位置,。
4. 數(shù)據(jù)處理與分析
- 標準曲線法：配制系列濃度標準品，繪制A-C標準曲線,，計算樣品濃度,。
- 差值法：用于復雜樣品，通過參比液與樣品的吸光度差值定量,。
- 記錄內(nèi)容：波長,、吸光度、參比液信息,、測量時間及環(huán)境條件,。
三、注意事項與常見問題
1. 避免污染與誤差
- 勿用手觸摸比色皿光學面,，指紋可用鏡頭紙蘸乙醇擦拭,。
- 測量揮發(fā)性樣品時，動作迅速并加蓋比色皿,，防止溶劑蒸發(fā)導致濃度變化,。
- 同一組實驗中,，參比液與樣品液的測量順序需交替進行,，減少系統(tǒng)誤差。
2. 光源維護
- 氘燈或鎢燈連續(xù)使用不超過4小時,，避免過熱損壞,。
- 關(guān)閉樣品室蓋后再調(diào)整參數(shù)，防止外界光線干擾,。
3. 故障排查
- 噪聲大：檢查電源穩(wěn)定性,，清潔檢測器窗口,。
- 基線漂移：重新校準參比液，確認波長準確性,。
- 吸光度異常：檢查比色皿是否匹配,，樣品是否有沉淀或渾濁。
四,、儀器維護與保養(yǎng)
1. 日常維護
- 測量結(jié)束后用蒸餾水沖洗比色皿,，晾干后存放。
- 清潔樣品室,，用防塵罩覆蓋儀器,，定期更換干燥劑。
- 每月檢查波長精度,，必要時聯(lián)系廠家校準,。
2. 長期停用
- 切斷電源，取出比色皿,，在樣品室放置干燥劑,。
- 記錄儀器使用日志，包括運行時間,、維修記錄及耗材更換情況,。
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