Pi-102 多功能熒光儀

原理

ATP是三磷酸腺酐的簡稱,，是細胞內供能分子,。Pi-102 食品細菌快速測定儀通過檢測樣品中ATP與熒光素酶的發(fā)光反應，得出光單位讀數(shù),，經(jīng)換算可估算出樣品中ATP總數(shù)水平,，進一步間接判斷樣品中微生物總數(shù)，為食品衛(wèi)生監(jiān)督現(xiàn)場檢測提供參考,。

首先使用相關試劑對細菌外ATP進行降解,、消除。再使用提取液釋放細菌內的ATP并通過酶阻止ATP的降解,，zui后加入熒光素酶與ATP進行發(fā)光反應,。

通過高靈敏度光電倍增管所測量的發(fā)光值與實際存在的ATP成正比。再通過與標準品比對,，就可能計算出被測樣品的ATP含量并以fg或RLU形式表示,。

應用范圍

食品工業(yè)、化妝品制造業(yè),、醫(yī)療單位衛(wèi)生監(jiān)測,。

配合試劑，可對測液體、固體食品,、表面等微生物總數(shù)做快速評估,。注意，結果為參考用,。

配置情況

熒光檢測儀 主機                 1 臺

檢測試劑 （選配）

Biothem 266-112 試劑盒（食品細菌總數(shù)檢測試劑盒）

技術參數(shù)

檢測精度    1 X 10^-18 mol/ATP/assay

檢測時間    默認5秒 （0.2-100秒可調）

檢測模式    RLU ,、 fg （細菌細胞ATP含量）

資料儲存    結果可分類儲存，800個記憶存儲

屏幕顯示    LCD

尺寸/重量    208 *105 * 93 （長*寬*高mm） / 1.5 kg

測量值      0 – 99,999 RLU

精確誤差    + / - 5 %

與PC連接   可實時檢測并傳輸結果

電力         內置 Ni/Cd 充電電池,，外接電源

Pi-102 食品細菌快速測定儀 與SystemSUREⅡ ATP 熒光儀對比

相關證書

美國MPC（Medical Packaging Corporation）總公司 ——Hygiena母公司出具：

美國公共健康與社會福利部（衛(wèi)生與公眾服務部）

食品及藥物管理局 許可證 No :2023790

美國加利福尼亞州 公眾衛(wèi)生部

食品及藥物管理局 生產(chǎn)許可證No :61193

注：本產(chǎn)品不屬于醫(yī)療器械

Pi-102熒光儀使用手冊

版本：1.0

目錄

1． 儀器

1．1          儀器簡介

1．2          應用試管尺寸

1．3          按鍵操作說明

1．4          電源管理

1．5          安裝snapshot的檢測倉

2． 測量

2．1   快速啟動

2．2   測量選項

2．2．1 目錄

2．2．2 選項

3． 維護和故障排除

3．1 維護

3．2 故障排除

質保承諾： 承諾聲明

Hygiena保證在Pi-102售出之后的12個月內對其性能和功能負責。由適當?shù)牟僮魉斐傻膶i-102的損壞以及使用未經(jīng)*的零配件均不在此保證范圍內,。

警告：

請在使用Pi-102熒光儀之前仔細閱讀此使用手冊,。

清潔前請務必斷開電源。只可使用濕抹布清潔儀器表面,，任何清潔劑都可能有損儀器表面,。

只可使用Pi-102的電源插頭，其它的電源設備可能損壞Pi-102,。

只有經(jīng)過*和培訓的人員才能從事Pi-102的維修和維護,。

此手冊敘述詳盡，Hygiena不對由于使用不當造成的損壞負責,。

與本文件相關的所有權利歸Hygiena所有,，未經(jīng)Hygiena書面*，不得擅自轉載本文件任何內容,。

Hygiena International Ltd.和Hygiena LLC是美國 Medical Packaging Corporation Inc.,子公司,。

1．儀器

1．1 儀器簡介

Pi-102熒光儀是一臺測量生物發(fā)光和化學發(fā)光的高靈敏度儀器。它可以獨立使用，也可以與PC機和配套軟件相連,。

1．2 應用試管規(guī)格

標準的Hygiena試管的尺寸是12×55mm,，但直徑在11－12mm，高在47－82mm范圍之內的試管都可在Pi-102機器上使用,。

Pi-102還提供了一個Hygiena snapshot檢測拭子（用于衛(wèi)生監(jiān)控）使用的附加倉,。在這種情況下無需使用試管。

1．3 鍵盤和顯示器

ON/OFF：開關鍵

??：回到上級菜單,，或跳出鍵

?和?：瀏覽菜單

         ：從菜單眾選擇程序,，或進入鍵

O O O ：顯示結果

關于Pi-102

Supply：連接電源

Charge（Std.）：使用電源操作Pi-102

Charge（Fast）：快速充電設備

1．4 電源

用戶可選擇使用電源或使用充電電池。當使用電源的同時,，Pi-102對電池進行充電,。Pi-102一側的“Charge”選擇鍵應置于“Std.”位置。若使用快充,，插入電源后將“Charge”選擇鍵至于“Fast”,。電池型號是Ni/Cd，為避免“記憶受損”,，等“empty”指示等亮再充電,。

1．5 安裝snapshot檢測的附加倉

建議在開啟Pi-102之前進行安裝。只要小心移除Pi-102上的倉蓋,，安放上附加部分再將倉蓋安裝在附加部分頂部,，附加倉就被輕松安裝好了。安裝時注意各部件連接正確并安裝在正確的位置,。這樣,，Pi-102就可檢測snapshot裝置了。去除附加倉只需除掉倉蓋和附加倉,，再把倉蓋蓋回倉口即可,。

2．     測量

2．1 快速啟動

? 推ON/OFF鍵

? 按    （目錄）

? 按    （OK），或按?在目錄中選擇02…08再按

? 按    （新）,，目錄中的舊結果被清除

? 按     開始測量

? 下一標本,，按     兩次

? 結果被保存，按?可瀏覽目錄中以前保存的結果

? 按??兩側,，推出測量

? 按ON/OFF鍵兩次,，關閉Pi-102。

注意：測量過程中請保持測量倉處于關閉狀態(tài),，測量完畢后再取出標本,。

2．2 測量選項

開機后，屏幕顯示兩行字：LIST（目錄）和OPTIONS（選項）,。

2．2．1 目錄：

您可選擇8個不同的目錄,，每個可執(zhí)行100個檢測。

選擇目錄請按    ，屏幕將顯示：

List 01

Name ……

100 pos     , 00 used

Esc   <    >      Ok

從以下四種可能性中選擇一種：

? 按??返回主目錄

? 按?選擇低數(shù)字的目錄

? 按?選擇高數(shù)字的目錄

? 按     確定顯示目錄

按    之后您將看到如下顯示：

           Old results from

           ……………（date + time）

           100 pos

           Esc          Old    New

從以下三種可能性中選擇一種：

? 按??返回主目錄

? 按?查看并標記已選目錄中的舊結果,。如果沒有舊結果,，Pi-102將要求您插入*個標本

? 按     從已選目錄中刪除舊結果

按    之后您將看到如下顯示：

…..（List Name） /    1

Name 1

Insert Sample

No Thresholds

插入標本，按    開始檢測,，檢測過程中綠色,、黃色和紅色指示燈亮。檢測結束,，您將看到以下顯示：

…（List Name） /    1

Name 1

                 2 RLU

No Thresholds

開始下一檢測,，按    兩次。如果您前次結果的記錄過長,，請在按     之后選擇“Overwrite result”,，按?鍵再按    。完成測量后按 ?? 兩次,。再按ON/OFF鍵兩次關機,。

2．2．2 選項

您可從主目錄中選擇“選項”目錄。在此目錄中您可選擇改變熒光儀設置的選項,。以下是對這些設置的解釋：

從主目錄中選擇“選項”只需按?鍵再按     ，顯示如下：

Units

Counting time

Self Test

Print List

Units（單位）：可以選擇結果以RLU或fg ATP表達,。一般來說檢測需以RLU來設置,。

Counting time（計數(shù)時間）：默認設定需要5.0秒，編程在0.2－100.0秒之間,，使用 ? 鍵再按     進行編程,。計數(shù)時間的不同不會導致RLU值的變化，因為顯示的RLU值是n×0.2秒時間間隔的平均值,。計數(shù)時間越長RLU值越準確,。

Self Test（自身檢測）：這是檢測測量倉是否避光。Pi-102會做一次空白檢測然后返回目錄,。開始自身檢測前,，請檢查測量倉是否被空置。

pi-102 食品細菌快速檢測儀

Microbial ATP Kit HS Biothema 266-112

1. 試劑盒包括以下試劑：（每套試劑可完成100次實驗）

1.1. ATP Reagent HS （4小瓶） ：含有凍干熒光素酶和熒光素,。熒光素酶參加反應后大約每分鐘消耗6%ATP,。

1.2. Diluent B 10ml （4小瓶） : 用于重新調配ATP ReagentHS 時的緩沖劑。

1.3. Extractant B/S 10 mL （1 小瓶） ：提取劑,。

1.4. ATP standard 5 mL （1 小瓶）： ATP標準液,，含有 10^-7 mol/L ATP。

1.5. ATP Eliminating Reagent （1 小瓶） ：ATP消除劑,。

1.6. Cell Lysing Reagent 10 mL （1 小瓶）：細胞裂解劑,，用于重新調配ATP消除劑 （ATP Eliminating Reagent）

2. 檢測原理：

2.1. 所有活體細胞均含有三磷酸腺苷ATP（Adenosine Triphosphate ，分子式C₁₀H₁₆N₅O₁₃P₃ ，化學簡式C10H8N4O2NH2（OH）2（PO3H）3H,，分子量約507.184）

2.2. 一個細菌體內ATP含量約為2x10^-18mol, 當細胞死亡后,，ATP一般也隨之消亡。通過檢測樣品中ATP含量,，可推算樣品中細菌總數(shù),。

3. 試劑使用前準備工作：

3.1. 揭開（請勿直接用手）ATP Reagent HS 瓶蓋。揭開Diluent B 瓶蓋,，將Diluent B倒入 ATP Reagent HS 試劑瓶,，混合后再將混合液倒回Diluent B 試劑瓶,避光冷藏保存。                                 

3.2. Extractant B/S 和 ATP Standard試劑可直接使用,。

3.3. ATP Eliminating Reagent與Cell Lysing Reagen混合后使用,。混合液可在冷藏狀態(tài)下保存一周以上,，在冷凍狀態(tài)下保存更長時間,。

4. 檢測反應步驟：

首先對細菌外ATP通過酶進行降解。然后使用Extractant B/S釋放細胞內的ATP并通過酶阻止ATP的降解,。zui后加入ATP Reagent HS分析ATP,。

通過光度計所測量的ATP與實際存在的ATP是成正比的。通過測量和比對加入一定量標準ATP之前和之后的結果,，就可能計算出被測未知樣品的ATP含量以fg或RLU形式表示,。

5. 檢測步驟：

1）      取被檢樣品按方法進行前處理。（后有說明）

2）      取處理后樣品50µL樣品和50µL ATP Eliminating Reagent于試管中,，靜置10分鐘,。

3）      直接加入50µL Extractant B/S 在試管中，之后確認所有的ATP Eliminating Reagent 都已經(jīng)和Extractant B/S進行了反應（用旋渦混合器或手動震蕩數(shù)秒）,。

4）      加入0.4mL ATP Reagent HS 并進行測量 M1 - Ismp,。

5）      加入10µL 100 nmol/L ATP Standard，約1pmol（10^-12） ATP,，再測量其值,，M2 - Ismp+std。

     注意：M2- M1 ： M1 值應大于10 ,，否則需重稀釋樣品檢測,。

6）      按此公式計算樣品中ATP總數(shù)。

公式為：                M1                                                     

 M2   -   M1     = X

7）      檢測結果評估,，推算1ml該樣品細菌數(shù),。

公式為：                  X * 10⁷ 

     ！ 結果值為近似值,，建議為參考用,。

國家食品微生物*（部分）

等,，具體請查閱相關標準。

6. 注意：

1.實驗所用試管和平板必須保證無ATP存在,。

2.請用不透光的玻璃或塑料容器盛放熒光試劑,，在進行反應時，應注意避免強光照射,。

3.可用含有細菌懸浮液的培養(yǎng)基做空白對照,。

4.同一樣品，*做3組重復實驗,。

5.實驗加入的 樣品,、ATP Eliminating Reagent、Extractant B/S 量必須*,。

6.Extractant B/S 和 ATP Reagent HS 比例相差不超過 1/4

7.ATP Standard 用量始終為 10 μL

8.實驗所用試劑計量越多,，結果精確度越高。

9.（I_smp+std - I_smp）值應比 I_smp 值高10倍以上,，否則樣品需再稀釋,。

10.如樣品為非細菌ATP含量較低，可省略清除非細菌ATP這一步,。

11.如果樣品中無細胞外游離ATP,，*使用266-311 試劑盒。

12.下列情況中細胞外游離ATP的影響可能依然明顯：

   A 細胞外游離ATP含量過高

   B 細胞內ATP 檢出率過低

   C 樣品所在的介質 對ATP 降解酶反應有抑制作用

   對應上述情況可延長10分鐘的孵育時間或加入更多濃縮ATP Eliminating Reagent

綜述：

Pi-102 食品細菌快速測定儀利用ATP生物發(fā)光法,，配合高靈敏光電倍增管和試劑,，可在10分鐘內對食品樣品（經(jīng)前處理）中所含微生物總數(shù)做出快速估算，將結果數(shù)值與國家相應標準對應,，可初步判斷食品樣品中微生物情況，如是否超標,。

但此方法所得結果僅供參考,，因ATP生物發(fā)光反應受各類因素（溫度、酸堿,、稀釋濃度等）影響,，結果與常規(guī)培養(yǎng)計數(shù)所得的CFU（colony formine unit,菌落形成單位）存在一定偏差，所以該檢測建議客戶設定臨界值做參考用,。

相比常規(guī)培養(yǎng)計數(shù)法,，該檢測快速、靈敏,，尤其是檢測水樣等微生物含量較低的樣品時,。

Pi-102 多功能熒光儀

原理

ATP是三磷酸腺酐的簡稱，是細胞內供能分子,。Pi-102 食品細菌快速測定儀通過檢測樣品中ATP與熒光素酶的發(fā)光反應,，得出光單位讀數(shù),，經(jīng)換算可估算出樣品中ATP總數(shù)水平，進一步間接判斷樣品中微生物總數(shù),，為食品衛(wèi)生監(jiān)督現(xiàn)場檢測提供參考,。

首先使用相關試劑對細菌外ATP進行降解、消除,。再使用提取液釋放細菌內的ATP并通過酶阻止ATP的降解,，zui后加入熒光素酶與ATP進行發(fā)光反應。

通過高靈敏度光電倍增管所測量的發(fā)光值與實際存在的ATP成正比,。再通過與標準品比對,，就可能計算出被測樣品的ATP含量并以fg或RLU形式表示。

應用范圍

食品工業(yè),、化妝品制造業(yè),、醫(yī)療單位衛(wèi)生監(jiān)測。

配合試劑,，可對測液體,、固體食品、表面等微生物總數(shù)做快速評估,。注意,，結果為參考用。

配置情況

熒光檢測儀 主機                 1 臺

檢測試劑 （選配）

Biothem 266-112 試劑盒（食品細菌總數(shù)檢測試劑盒）

技術參數(shù)

檢測精度    1 X 10^-18 mol/ATP/assay

檢測時間    默認5秒 （0.2-100秒可調）

檢測模式    RLU ,、 fg （細菌細胞ATP含量）

資料儲存    結果可分類儲存,，800個記憶存儲

屏幕顯示    LCD

尺寸/重量    208 *105 * 93 （長*寬*高mm） / 1.5 kg

測量值      0 – 99,999 RLU

精確誤差    + / - 5 %

與PC連接   可實時檢測并傳輸結果

電力         內置 Ni/Cd 充電電池，外接電源

Pi-102 食品細菌快速測定儀 與SystemSUREⅡ ATP 熒光儀對比

相關證書

美國MPC（Medical Packaging Corporation）總公司 ——Hygiena母公司出具：

美國公共健康與社會福利部（衛(wèi)生與公眾服務部）

食品及藥物管理局 許可證 No :2023790

美國加利福尼亞州 公眾衛(wèi)生部

食品及藥物管理局 生產(chǎn)許可證No :61193

注：本產(chǎn)品不屬于醫(yī)療器械

Pi-102熒光儀使用手冊

版本：1.0

目錄

1．  儀器

1．1          儀器簡介

1．2          應用試管尺寸

1．3          按鍵操作說明

1．4          電源管理

1．5          安裝snapshot的檢測倉

2．  測量

2．1   快速啟動

2．2   測量選項

2．2．1 目錄

2．2．2 選項

3．  維護和故障排除

3．1 維護

3．2 故障排除

質保承諾： 承諾聲明

Hygiena保證在Pi-102售出之后的12個月內對其性能和功能負責,。由適當?shù)牟僮魉斐傻膶i-102的損壞以及使用未經(jīng)*的零配件均不在此保證范圍內,。

警告：

請在使用Pi-102熒光儀之前仔細閱讀此使用手冊,。

清潔前請務必斷開電源。只可使用濕抹布清潔儀器表面,，任何清潔劑都可能有損儀器表面,。

只可使用Pi-102的電源插頭，其它的電源設備可能損壞Pi-102,。

只有經(jīng)過*和培訓的人員才能從事Pi-102的維修和維護,。

此手冊敘述詳盡，Hygiena不對由于使用不當造成的損壞負責,。

與本文件相關的所有權利歸Hygiena所有,，未經(jīng)Hygiena書面*，不得擅自轉載本文件任何內容,。

Hygiena International Ltd.和Hygiena LLC是美國 Medical Packaging Corporation Inc.,子公司,。

1．儀器

1．1 儀器簡介

Pi-102熒光儀是一臺測量生物發(fā)光和化學發(fā)光的高靈敏度儀器。它可以獨立使用,，也可以與PC機和配套軟件相連,。

1．2 應用試管規(guī)格

標準的Hygiena試管的尺寸是12×55mm，但直徑在11－12mm,，高在47－82mm范圍之內的試管都可在Pi-102機器上使用,。

Pi-102還提供了一個Hygiena snapshot檢測拭子（用于衛(wèi)生監(jiān)控）使用的附加倉。在這種情況下無需使用試管,。

1．3 鍵盤和顯示器

ON/OFF：開關鍵

??：回到上級菜單,，或跳出鍵

?和?：瀏覽菜單

         ：從菜單眾選擇程序，或進入鍵

O O O ：顯示結果

關于Pi-102

Supply：連接電源

Charge（Std.）：使用電源操作Pi-102

Charge（Fast）：快速充電設備

1．4 電源

用戶可選擇使用電源或使用充電電池,。當使用電源的同時,，Pi-102對電池進行充電。Pi-102一側的“Charge”選擇鍵應置于“Std.”位置,。若使用快充,，插入電源后將“Charge”選擇鍵至于“Fast”。電池型號是Ni/Cd,，為避免“記憶受損”,，等“empty”指示等亮再充電,。

1．5 安裝snapshot檢測的附加倉

建議在開啟Pi-102之前進行安裝,。只要小心移除Pi-102上的倉蓋，安放上附加部分再將倉蓋安裝在附加部分頂部,，附加倉就被輕松安裝好了,。安裝時注意各部件連接正確并安裝在正確的位置。這樣,，Pi-102就可檢測snapshot裝置了,。去除附加倉只需除掉倉蓋和附加倉,，再把倉蓋蓋回倉口即可。

2．     測量

2．1 快速啟動

? 推ON/OFF鍵

? 按    （目錄）

? 按    （OK）,，或按?在目錄中選擇02…08再按

? 按    （新）,，目錄中的舊結果被清除

? 按     開始測量

? 下一標本，按     兩次

? 結果被保存,，按?可瀏覽目錄中以前保存的結果

? 按??兩側,，推出測量

? 按ON/OFF鍵兩次，關閉Pi-102,。

注意：測量過程中請保持測量倉處于關閉狀態(tài),，測量完畢后再取出標本。

2．2 測量選項

開機后,，屏幕顯示兩行字：LIST（目錄）和OPTIONS（選項）,。

2．2．1 目錄：

您可選擇8個不同的目錄，每個可執(zhí)行100個檢測,。

選擇目錄請按    ,，屏幕將顯示：

List 01

Name ……

100 pos     , 00 used

Esc   <    >      Ok

從以下四種可能性中選擇一種：

? 按??返回主目錄

? 按?選擇低數(shù)字的目錄

? 按?選擇高數(shù)字的目錄

? 按     確定顯示目錄

按    之后您將看到如下顯示：

           Old results from

           ……………（date + time）

           100 pos

           Esc          Old    New

從以下三種可能性中選擇一種：

? 按??返回主目錄

? 按?查看并標記已選目錄中的舊結果。如果沒有舊結果,，Pi-102將要求您插入*個標本

? 按     從已選目錄中刪除舊結果

按    之后您將看到如下顯示：

…..（List Name） /    1

Name 1

Insert Sample

No Thresholds

插入標本,，按    開始檢測，檢測過程中綠色,、黃色和紅色指示燈亮,。檢測結束，您將看到以下顯示：

…（List Name） /    1

Name 1

                 2 RLU

No Thresholds

開始下一檢測,，按    兩次,。如果您前次結果的記錄過長，請在按     之后選擇“Overwrite result”,，按?鍵再按    ,。完成測量后按 ?? 兩次。再按ON/OFF鍵兩次關機,。

2．2．2 選項

您可從主目錄中選擇“選項”目錄,。在此目錄中您可選擇改變熒光儀設置的選項。以下是對這些設置的解釋：

從主目錄中選擇“選項”只需按?鍵再按     ,，顯示如下：

Units

Counting time

Self Test

Print List

Units（單位）：可以選擇結果以RLU或fg ATP表達,。一般來說檢測需以RLU來設置。

Counting time（計數(shù)時間）：默認設定需要5.0秒,，編程在0.2－100.0秒之間,，使用 ? 鍵再按     進行編程。計數(shù)時間的不同不會導致RLU值的變化,，因為顯示的RLU值是n×0.2秒時間間隔的平均值,。計數(shù)時間越長RLU值越準確,。

Self Test（自身檢測）：這是檢測測量倉是否避光。Pi-102會做一次空白檢測然后返回目錄,。開始自身檢測前,，請檢查測量倉是否被空置。

pi-102 食品細菌快速檢測儀

Microbial ATP Kit HS Biothema 266-112

1. 試劑盒包括以下試劑：（每套試劑可完成100次實驗）

1.1. ATP Reagent HS （4小瓶） ：含有凍干熒光素酶和熒光素,。熒光素酶參加反應后大約每分鐘消耗6%ATP,。

1.2. Diluent B 10ml （4小瓶） : 用于重新調配ATP ReagentHS 時的緩沖劑。

1.3. Extractant B/S 10 mL （1 小瓶） ：提取劑,。

1.4. ATP standard 5 mL （1 小瓶）： ATP標準液,，含有 10^-7 mol/L ATP。

1.5. ATP Eliminating Reagent （1 小瓶） ：ATP消除劑,。

1.6. Cell Lysing Reagent 10 mL （1 小瓶）：細胞裂解劑,，用于重新調配ATP消除劑 （ATP Eliminating Reagent）

2. 檢測原理：

2.1. 所有活體細胞均含有三磷酸腺苷ATP（Adenosine Triphosphate ，分子式C₁₀H₁₆N₅O₁₃P₃ ,，化學簡式C10H8N4O2NH2（OH）2（PO3H）3H,，分子量約507.184）

2.2. 一個細菌體內ATP含量約為2x10^-18mol, 當細胞死亡后，ATP一般也隨之消亡,。通過檢測樣品中ATP含量,，可推算樣品中細菌總數(shù)。

3. 試劑使用前準備工作：

3.1. 揭開（請勿直接用手）ATP Reagent HS 瓶蓋,。揭開Diluent B 瓶蓋,，將Diluent B倒入 ATP Reagent HS 試劑瓶，混合后再將混合液倒回Diluent B 試劑瓶,避光冷藏保存,。                                 

3.2. Extractant B/S 和 ATP Standard試劑可直接使用,。

3.3. ATP Eliminating Reagent與Cell Lysing Reagen混合后使用?；旌弦嚎稍诶洳貭顟B(tài)下保存一周以上,，在冷凍狀態(tài)下保存更長時間。

4. 檢測反應步驟：

首先對細菌外ATP通過酶進行降解,。然后使用Extractant B/S釋放細胞內的ATP并通過酶阻止ATP的降解,。zui后加入ATP Reagent HS分析ATP。

通過光度計所測量的ATP與實際存在的ATP是成正比的,。通過測量和比對加入一定量標準ATP之前和之后的結果,，就可能計算出被測未知樣品的ATP含量以fg或RLU形式表示。

5. 檢測步驟：

1）      取被檢樣品按方法進行前處理,。（后有說明）

2）      取處理后樣品50µL樣品和50µL ATP Eliminating Reagent于試管中,，靜置10分鐘,。

3）      直接加入50µL Extractant B/S 在試管中,，之后確認所有的ATP Eliminating Reagent 都已經(jīng)和Extractant B/S進行了反應（用旋渦混合器或手動震蕩數(shù)秒）,。

4）      加入0.4mL ATP Reagent HS 并進行測量 M1 - Ismp。

5）      加入10µL 100 nmol/L ATP Standard,，約1pmol（10^-12） ATP,，再測量其值，M2 - Ismp+std,。

     注意：M2- M1 ： M1 值應大于10 ,，否則需重稀釋樣品檢測。

6）      按此公式計算樣品中ATP總數(shù),。

公式為：                M1                                                     

 M2   -   M1     = X

7）      檢測結果評估,，推算1ml該樣品細菌數(shù)。

公式為：                  X * 10⁷ 

     ,！ 結果值為近似值,，建議為參考用。

國家食品微生物*（部分）

等,，具體請查閱相關標準,。

6. 注意：

1.實驗所用試管和平板必須保證無ATP存在。

2.請用不透光的玻璃或塑料容器盛放熒光試劑,，在進行反應時,，應注意避免強光照射。

3.可用含有細菌懸浮液的培養(yǎng)基做空白對照,。

4.同一樣品,，*做3組重復實驗。

5.實驗加入的 樣品,、ATP Eliminating Reagent,、Extractant B/S 量必須*。

6.Extractant B/S 和 ATP Reagent HS 比例相差不超過 1/4

7.ATP Standard 用量始終為 10 μL

8.實驗所用試劑計量越多,，結果精確度越高,。

9.（I_smp+std - I_smp）值應比 I_smp 值高10倍以上，否則樣品需再稀釋,。

10.如樣品為非細菌ATP含量較低,，可省略清除非細菌ATP這一步。

11.如果樣品中無細胞外游離ATP,，*使用266-311 試劑盒,。

12.下列情況中細胞外游離ATP的影響可能依然明顯：

   A 細胞外游離ATP含量過高

   B 細胞內ATP 檢出率過低

   C 樣品所在的介質 對ATP 降解酶反應有抑制作用

   對應上述情況可延長10分鐘的孵育時間或加入更多濃縮ATP Eliminating Reagent

綜述：

Pi-102 食品細菌快速測定儀利用ATP生物發(fā)光法，配合高靈敏光電倍增管和試劑,，可在10分鐘內對食品樣品（經(jīng)前處理）中所含微生物總數(shù)做出快速估算,，將結果數(shù)值與國家相應標準對應，可初步判斷食品樣品中微生物情況，如是否超標,。

但此方法所得結果僅供參考,，因ATP生物發(fā)光反應受各類因素（溫度、酸堿,、稀釋濃度等）影響,，結果與常規(guī)培養(yǎng)計數(shù)所得的CFU（colony formine unit,菌落形成單位）存在一定偏差，所以該檢測建議客戶設定臨界值做參考用,。

相比常規(guī)培養(yǎng)計數(shù)法,，該檢測快速、靈敏,，尤其是檢測水樣等微生物含量較低的樣品時,。