用于 RT-PCR 的 SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化,，以從純化 poly(A)⁺ 或總 RNA 合成第一鏈 cDNA。使用該系統(tǒng)可檢測 100 bp 至 >12 kb 的 RNA 靶標(biāo),。起始材料量的范圍為 1 pg – 5 µg 總 RNA,。SuperScript™ III 反轉(zhuǎn)錄酶是一款 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶，其經(jīng)過基因改造以降低 RNase H 活性和提高熱穩(wěn)定性,。該酶可用于在 42–55°C 溫度范圍內(nèi)合成 cDNA,，相對(duì)于其他反轉(zhuǎn)錄酶，具有更高的特異性和 cDNA 得率以及更多的全長產(chǎn)物,。因?yàn)?SuperScript™ III RT 不會(huì)受到核糖體和轉(zhuǎn)運(yùn) RNA 的顯著抑制,，所以其可用于從總 RNA 制備物合成第一鏈 cDNA 的過程。

使用 SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng)
在第一步中,，使用總 RNA 或 poly(A)⁺ 選定 RNA（由 oligo(dT),、隨機(jī)引物或基因特異性引物引發(fā)）合成 cDNA 。在第二步中,，在另一根管中使用目標(biāo)基因特異性引物進(jìn)行 PCR,。對(duì)于 PCR 反應(yīng)，我們推薦使用以下 DNA 聚合酶之一：Platinum™Taq DNA 聚合酶可提供自動(dòng)熱啟動(dòng)條件,，使特異性提高至 4 kb,，Platinum™Taq 高保真 DNA 聚合酶可為高達(dá) 15 kb 的靶標(biāo)提供更高的得率和高保真度，而 Platinum™Pfx DNA 聚合酶可為高達(dá) 12 kb 的靶標(biāo)提供極大保真度,。

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