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我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松,、更快捷,。為了實現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實驗方法和引進(jìn)新的產(chǎn)品,控制和降低各種成本,,為您的研究加油,。這既是一項長期而艱巨的工作,又是一項光榮的工作,,同時也是我們企業(yè)發(fā)展的動力源泉,。

 

 

 

 

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1. KI小鼠模型的定義與技術(shù)原理

KI(Knock-in) 指通過基因編輯技術(shù)將特定外源序列(如點突變,、報告基因,、人類基因片段)精準(zhǔn)插入小鼠基因組特定位點,實現(xiàn)對內(nèi)源基因的定向修飾,。

  • 技術(shù)基礎(chǔ)

    • 同源重組(ES細(xì)胞打靶) :傳統(tǒng)方法,利用胚胎干細(xì)胞進(jìn)行基因靶向,,穩(wěn)定性高但周期長(約6-8個月),。

    • CRISPR/Cas9:現(xiàn)代主流技術(shù),直接對受精卵編輯,,效率高,、周期短(可縮至4個月),支持大片段插入(最大300kb),。

       
  • 核心目的

    • 模擬人類疾病突變(如亨廷頓病CAG重復(fù)擴(kuò)展)

    • 插入報告基因(如EGFP,、tdTomato)實現(xiàn)細(xì)胞示蹤

       
    • 構(gòu)建人源化模型(替換小鼠基因為人類同源序列)

       

2. KI小鼠模型的分類與典型品系

(1)疾病模擬型

疾病領(lǐng)域代表品系基因修飾表型特征
亨廷頓病HdhQ150 (UAB系列)人源化Htt外顯子1插入150 CAG重復(fù)進(jìn)行性運動障礙、神經(jīng)元包涵體
多系統(tǒng)wei縮未命名(結(jié)腸病理模型)未公開突變結(jié)腸壁變薄,、糖原積累減少
神經(jīng)肌肉疾病Gle1 KI9核苷酸插入模擬剪接突變運動神經(jīng)元功能障礙

 

(2)工具型

  • 報告基因模型

    • Cubn-sGFP-P2A-nLacZ(熒光示蹤)

    • Tubb3-2A-EGFP(神經(jīng)元標(biāo)記)

    • B-CAG-tdTomato cKI(Cre依賴型紅色熒光)

  • 條件性基因操作工具

    • Trpv1-Myc-IRES-Cre(疼痛神經(jīng)元特異調(diào)控)

    • Trdc-IRES-CreERT2(誘導(dǎo)型T細(xì)胞編輯)

(3)人源化免疫模型

  • 免疫缺陷宿主:NOD/LtSz-scid小鼠(缺乏T/B細(xì)胞,,NK活性低)作為基礎(chǔ),支持人免疫細(xì)胞移植,。

  • 人免疫系統(tǒng)重建
    聯(lián)合移植人胎胸腺/肝臟組織與CD34?干細(xì)胞,,形成功能性人T/B細(xì)胞。


3. 核心應(yīng)用領(lǐng)域

(1)疾病機(jī)制解析

  • 神經(jīng)退行性疾病:亨廷頓病KI模型揭示CAG重復(fù)長度與病理嚴(yán)重度正相關(guān),。

  • 腫瘤研究:人源化PD-1-EGFP KI模型(B-PD-1-EGFP)用于腫瘤免疫微環(huán)境示蹤,。

  • 代謝與器官病變:結(jié)腸特異性KI模型成功模擬人類組織wei縮和糖代謝異常。

(2)藥物研發(fā)平臺

  • 藥效評價:人源化抗體生產(chǎn)模型(如全人源抗體KI小鼠)。

  • 藥代動力學(xué):藥物代謝酶人源化模型(如CYP450家族替換),。

(3)前沿技術(shù)整合

  • 活體示蹤:EGFP/tdTomato報告基因?qū)崿F(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移實時監(jiān)測,。

  • 光遺傳調(diào)控:Cre依賴型KI小鼠結(jié)合光遺傳學(xué)精準(zhǔn)操控神經(jīng)回路。


4. 技術(shù)優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢

  • 精準(zhǔn)性:靶向位點整合避免轉(zhuǎn)基因隨機(jī)插入的不可控性,。

  • 生理相關(guān)性:人源化模型保留內(nèi)源調(diào)控機(jī)制(如啟動子控制),。

  • 多功能拓展:支持條件性誘導(dǎo)(CreERT2)、雙報告基因標(biāo)記等復(fù)合設(shè)計,。

局限性

  • 技術(shù)復(fù)雜度:大片段插入(>20kb)需多輪靶向,,失敗率高。

  • 物種差異殘留:人源化模型仍受小鼠微環(huán)境影響(如細(xì)胞因子不匹配),。

  • 成本與周期:CRISPR加速流程但定制模型仍需4-12個月,。




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