細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒（磷酸鈣法）
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/6/27 23:36:28
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保存溫度
-20℃保存
注意事項(xiàng)
注意微生物污染
有效期
6個(gè)月
儀器準(zhǔn)備
1. 離心機(jī)
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液 2.HBSS
耗材準(zhǔn)備
1. 離心管
2. 吸頭
3. 一次性手套
2. 吸頭
3. 一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1. 注意無(wú)菌操作,，盡量避免污染。
2. DNA不應(yīng)含有蛋白和酚,。
3. 休克處理某些細(xì)胞系會(huì)使轉(zhuǎn)染效率大大提高,，但應(yīng)注意甘油暴露過(guò)久易導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。
4. 轉(zhuǎn)染12～24h后，可以加入終濃度為10mmol/L的丁酸鈉溶液,，可以提高病毒滴度,。
5. BBS Solution的pH值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中,，以免被空氣中的二氧化碳酸化,。
6. 轉(zhuǎn)染時(shí)，把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中,，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中,。
7. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8,，并且電泳檢測(cè)抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋,。
8. 在用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用濃度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的濃度為3%左右,。
9. 轉(zhuǎn)染時(shí)由于質(zhì)粒不同,、細(xì)胞不同，的質(zhì)粒用量需自行摸索,。
2. DNA不應(yīng)含有蛋白和酚,。
3. 休克處理某些細(xì)胞系會(huì)使轉(zhuǎn)染效率大大提高,，但應(yīng)注意甘油暴露過(guò)久易導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。
4. 轉(zhuǎn)染12～24h后，可以加入終濃度為10mmol/L的丁酸鈉溶液,，可以提高病毒滴度,。
5. BBS Solution的pH值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中,，以免被空氣中的二氧化碳酸化,。
6. 轉(zhuǎn)染時(shí)，把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中,，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中,。
7. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8,，并且電泳檢測(cè)抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋,。
8. 在用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用濃度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的濃度為3%左右,。
9. 轉(zhuǎn)染時(shí)由于質(zhì)粒不同,、細(xì)胞不同，的質(zhì)粒用量需自行摸索,。
使用方法
貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 在轉(zhuǎn)染前24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞,，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中，待細(xì)胞密度大70～80%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。后續(xù)操作步驟均按6孔板計(jì)算,，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量,。
2. 在加入DNA之前2～4h,，加入2ml不含抗生素的培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
3. 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加入100μl Calcium chloride solution,，混勻，即為DNA-CaCl2溶液,。
4. 取BBS solution 100μl,，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液(操作緩慢,，一般在1～2min),。
5. 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液,，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀,。
6. 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板細(xì)胞中，輕輕晃動(dòng)混勻,。
7. 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
8. 去除培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá),。
懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 低速離心收集懸浮細(xì)胞，用PBS洗滌1次,。
2. 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加Calcium chloride solution,，混勻，即為DNA-CaCl2溶液,。
3. 取BBS solution,，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液,。
4. 室溫靜置,，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀,。
5. 每106個(gè)細(xì)胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置,。
6. 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的培養(yǎng)基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板中,，輕輕晃動(dòng)混勻。
7. 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),，去除培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá),。
1. 在轉(zhuǎn)染前24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞,，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中，待細(xì)胞密度大70～80%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。后續(xù)操作步驟均按6孔板計(jì)算,，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量,。
2. 在加入DNA之前2～4h,，加入2ml不含抗生素的培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
3. 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加入100μl Calcium chloride solution,，混勻，即為DNA-CaCl2溶液,。
4. 取BBS solution 100μl,，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液(操作緩慢,，一般在1～2min),。
5. 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液,，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀,。
6. 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板細(xì)胞中，輕輕晃動(dòng)混勻,。
7. 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
8. 去除培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá),。
懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 低速離心收集懸浮細(xì)胞，用PBS洗滌1次,。
2. 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加Calcium chloride solution,，混勻，即為DNA-CaCl2溶液,。
3. 取BBS solution,，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液,。
4. 室溫靜置,，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀,。
5. 每106個(gè)細(xì)胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置,。
6. 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的培養(yǎng)基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板中,，輕輕晃動(dòng)混勻。
7. 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),，去除培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá),。
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