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細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（陽(yáng)離子聚合物法,，非脂質(zhì)體）
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
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- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/6/27 23:33:13
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注意事項(xiàng)
注意微生物污染
有效期
一年
使用注意事項(xiàng)
1. 注意無(wú)菌操作，盡量避免污染,。
2. DNA不應(yīng)含有蛋白和酚,。
3. 為了取得較高的轉(zhuǎn)染效率，推薦使用在50代以內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件,，要確保OD260/OD280≥1.8.
5. 該轉(zhuǎn)染試劑不應(yīng)渦旋或離心,，宜緩慢晃動(dòng)混勻。
6. 在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中,，可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)在轉(zhuǎn)染試劑：DNA（ug）=2:1~6:1之間選擇比例,。
7. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，如細(xì)胞類型,、細(xì)胞狀態(tài)及密度,、DNA/siRNA轉(zhuǎn)染量、轉(zhuǎn)染試劑與DNA/siRNA比例等,，應(yīng)再具體實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件,。
2. DNA不應(yīng)含有蛋白和酚,。
3. 為了取得較高的轉(zhuǎn)染效率，推薦使用在50代以內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件,，要確保OD260/OD280≥1.8.
5. 該轉(zhuǎn)染試劑不應(yīng)渦旋或離心,，宜緩慢晃動(dòng)混勻。
6. 在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中,，可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)在轉(zhuǎn)染試劑：DNA（ug）=2:1~6:1之間選擇比例,。
7. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，如細(xì)胞類型,、細(xì)胞狀態(tài)及密度,、DNA/siRNA轉(zhuǎn)染量、轉(zhuǎn)染試劑與DNA/siRNA比例等,，應(yīng)再具體實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件,。
使用方法
DNA轉(zhuǎn)染（以12孔板為例）：
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中,，并將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),，待細(xì)胞密度大70～90%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計(jì)算,，如果轉(zhuǎn)染器皿不同,，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的DNA之前2～4h,，加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液,，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液,，但抗生素使某些細(xì)胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細(xì)胞毒性,。
3. 配制染色工作液：取2個(gè)無(wú)菌離心管，分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液,，取其中一離心管加入1.6~3ugDNA,，輕輕混勻；取另一離心管加入3ul轉(zhuǎn)染試劑,，輕輕混勻,。室溫靜置5min，將含有DNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中，輕輕吹打混勻,，室溫靜置20min,。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中，輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng),。
5. 培養(yǎng)4~6h后,，更換為含有血清的培養(yǎng)液。對(duì)于Hela細(xì)胞,，推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液,；對(duì)于NIH3T3、 CHO,、 HEK293T和 HEK293FT 細(xì)胞,，推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
6. 繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后,，觀察或收集細(xì)胞或加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物如G418等進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選,。
（二）siRNA轉(zhuǎn)染（以12孔板為例）：
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中,，并將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),，待細(xì)胞密度大50～80%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計(jì)算,，如果轉(zhuǎn)染器皿不同,，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的siRNA之前2～4h,，加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液,，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液,，但抗生素使某些細(xì)胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細(xì)胞毒性,。
3. 配制染色工作液：取2個(gè)無(wú)菌離心管，分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液,，取其中一離心管加入40pmol siRNA,，輕輕混勻；取另一離心管加入2ul轉(zhuǎn)染試劑,，輕輕混勻,。室溫靜置5min，將含有siRNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中,，輕輕吹打混勻,，室溫靜置20min。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中,，輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng),。
5. 培養(yǎng)4~6h后，更換為含有血清的培養(yǎng)液。對(duì)于Hela細(xì)胞,，推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液,；對(duì)于NIH3T3、 CHO,、 HEK293T和 HEK293FT 細(xì)胞,，推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
6. 繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后,，觀察或收集細(xì)胞,。
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