【摘要】：轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）是一種細(xì)胞外糖基化蛋白,，屬于轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）超家族成員,。它通過I型和II型受體（TGFβR1和TGFβR2）介導(dǎo)信號傳導(dǎo)，在細(xì)胞遷移,、增殖,、分化、胚胎發(fā)育,、免疫調(diào)節(jié)及組織修復(fù)等生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,。TGF-β2的信號傳導(dǎo)主要通過下游SMAD蛋白的磷酸化實(shí)現(xiàn)，調(diào)控目標(biāo)基因表達(dá),。其生物學(xué)功能廣泛,，包括抑制免疫細(xì)胞過度活化、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成,、參與胚胎發(fā)育中的器官形成和組織模式化,，以及在傷口愈合中調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和新生血管形成。

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牛轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒組成

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

技術(shù)小提示：

1）加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制再10分鐘內(nèi),。

2）可用洗板機(jī)洗板,，每一步洗滌充分都是實(shí)驗(yàn)的根本。

3）根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長孵育時(shí)間,，但不可超過30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度的時(shí)候即可終止。

4）終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同,。

5）實(shí)驗(yàn)完畢后將未使用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至保質(zhì)期,。

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