可用于ELISA實驗的樣本一般有血清,、血漿,、尿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液以及組織勻漿等,。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同,。（由于ELISA只能檢測可溶性蛋白質(zhì)的含量,，因此要求樣本應(yīng)清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質(zhì)）

液體樣本處理原則：所有的液體樣本,，用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜,，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項：收集血液樣本應(yīng)避免溶血,，因為紅細(xì)胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，這種情況下，ELISA實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外,，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染,，因為細(xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項：檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書,，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求,。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織jian碎,。將jian碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測,。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

【尿液、胸腹水,、腦脊液】：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

【樣品保存】：為確保實驗的準(zhǔn)確性,，樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測）,，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融,，標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

【注意事項】：樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,，否則會造成假陰性結(jié)果,。