微囊藻毒素試劑盒

一、基本原理

酶聯(lián)免疫（ELISA）是免疫酶技術(shù)的一種,，是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶反應(yīng)的敏感性相結(jié)合而建立的一種新技術(shù)ELISA的技術(shù)原理是：將酶分子與抗體（或抗原）結(jié)合,，形成穩(wěn)定的酶標(biāo)抗體（或抗原）結(jié)合物，當(dāng)酶標(biāo)抗體（或抗原）與固相載體上的相應(yīng)抗原（或抗體）結(jié)合時(shí),，即可在底物溶液參與下,，產(chǎn)生肉眼可見的顏色反應(yīng)，顏色的深淺與抗原或抗體的量成比例關(guān)系,，使用ELISA檢測儀,，即酶標(biāo)儀,，測定其吸收值可做出定量分析。此技術(shù)具有特異,、敏感,、結(jié)果判斷客觀、簡便和安全等優(yōu)點(diǎn),，日益受到重視,，不僅在微生物學(xué)中應(yīng)用廣，而且也被其他學(xué)科領(lǐng)域廣為采用,。本試劑盒工作原理如下圖所示,。

二、已配試劑

ELISA試劑盒中配備以下條目：

1,、96孔已包被好的酶標(biāo)板

2、標(biāo)準(zhǔn)1：0.1 ng/mL的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)溶液

3,、標(biāo)準(zhǔn)2：0.2 ng/mL的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)溶液

4,、標(biāo)準(zhǔn)3：0.5 ng/mL的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)溶液

5、標(biāo)準(zhǔn)4：1 ng/mL的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)溶液

6,、標(biāo)準(zhǔn)5：2 ng/mL的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)溶液

7,、1瓶溶液1 （單抗）

8、1只溶液2 (此溶液僅為二抗稀釋所用,，并非二抗溶液,，請按稀釋比例量取,！)

9,、二抗（小管內(nèi)含2.4 μL酶標(biāo)二抗，4℃保存）,。

10,、1瓶溶液3（底物溶液）

11、1瓶溶液4 （終止液）

12,、1袋固體PBS（配置洗滌液用）

13,、1只Tween 20 （配置洗滌液用）

三、操作步驟

1,、分別吸取50 μL毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與對應(yīng)的孔中（參照表1）,，然后吸取50 μL單克隆抗體（溶液1）加入每孔中，輕輕混勻,。37oC或室溫放置90分鐘,。注意：必須先加標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，再加單克隆抗體溶液,。

2,、洗板

在水池邊快速甩出酶標(biāo)板中的液體,。用吸管吸取洗滌液，加入板孔中,，洗滌液量以加滿但不溢出板孔為宜,。甩出洗滌液，再加洗滌液,，重復(fù)上述操作三次,，每次操作3分鐘。在濾紙上拍干,。若有洗板機(jī),，可直接在洗板機(jī)上操作。

注意：切忌溢出互混,！

3,、每孔加入100 μL酶標(biāo)二抗稀釋液，37oC或室溫放置30分鐘,。

4,、洗板

同2方法，此步驟必須洗滌五次,，每次3分鐘,。

5、加底物溶液3

立即用排槍或吸管吸取此種溶液,，分別加于板孔中,，每孔100 μL，置37oC或室溫顯色,，經(jīng)常觀察,，顯色時(shí)間不超過30分鐘。

6,、終止反應(yīng)

有明顯顏色顯示后,，立即加50 μL 溶液4 1 mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

7,、判斷結(jié)果

肉眼觀察（白色背景）,，陰性對照孔應(yīng)明顯黃色。

測光密度,，酶標(biāo)儀取λ=450 nm,。注意：加終止液后，30分鐘以內(nèi)檢測,。

注意：滴加試劑量要準(zhǔn),，且試劑不可從一孔流到另一孔中，每種試劑對應(yīng)一種吸管（或槍頭）,，不能混淆,。