Edman降解的工作流程檢測技術服務詳情介紹

在dànbáizhì組學飛速發(fā)展的jīntiān,，質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）已成為主流蛋白測序手段。然而,，Edman降解（Edman degradation）作為一種經(jīng)典的Nduāncèxù技術,，依舊在特定場景中具有bùkětìdài的價值。尤其是在確認dànbáizhìN端修飾,、驗證重組蛋白表達正確性或新型肽段結(jié)構(gòu)鑒定方面,，Edman降解以其直接、jīngquè的特性發(fā)揮著dútè作用,。

什么是Edman降解,？

Edman降解是一種基于化學反應的順序性氨基酸切除方法，用于從多肽鏈N端開始逐個識別氨基酸殘基,。其原理由Pehr Edman于1950年提出,，并迅速成為20世紀dànbáizhì一級結(jié)構(gòu)研究的重要工具。

Edman降解的標準工作流程

Step 1：樣品準備（Sample Preparation）

• 樣本要求：高純度,、多肽鏈長度通常在30個氨基酸以內(nèi),，N端未被修飾（如乙酰化或阻斷）,。

• 固定方式：通常將肽鏈通過共價鍵固定于固相載體（如PVDF膜）,，以便后續(xù)循環(huán)操作。

Step 2：N端氨基酸標記（Labeling）

• 使用苯異硫氰酸酯（PITC, phenylisothiocyanate）與N端氨基酸發(fā)生反應,，形成PTH-氨基酸衍生物,。

• 該反應在堿性條件下進行，通?？刂圃趐H 9.0左右,，以促進高效衍生化。

Step 3：選擇性裂解（Cleavage）

• 在酸性條件（如三fúyǐsuān存在下）下,，斷裂N端氨基酸與多肽主鏈之間的肽鍵,。

• 此步驟不會破壞剩余肽鏈，確保反應具有高度順序性和循環(huán)性,。

Step 4：PTH-氨基酸鑒定（Identification）

• 所得到的PTH-氨基酸通過高效液相色譜（HPLC）或毛細管電泳進行分離和鑒定,。

• 每一個氨基酸都有dútè保留時間，便于與標準品比對,，完成定性分析,。

Step 5：循環(huán)執(zhí)行（Cycle Repetition）

• 剩余肽鏈重復步驟2-4，每一輪提取一個N端氨基酸，直到多肽鏈長度耗盡或信號減弱至無法檢測,。

• 通常Edman降解可穩(wěn)定進行15–20輪,，但在高質(zhì)量樣本與zhuānyè操作下，也能延伸至30個殘基以上,。

Edman降解的優(yōu)勢與局限

? 優(yōu)勢

• N端專一性強：對肽鏈起始殘基有直接測序能力,，適用于抗體、激素,、信號肽驗證等場景,；

• 無需復雜數(shù)據(jù)庫比對：不同于MS，Edman降解直接輸出序列,，避免算法偏差,；

• 適合小分子肽段分析：尤其適合30個氨基酸以內(nèi)的結(jié)構(gòu)解析。

??局限

• N端修飾限制：如N-乙?；?、N-甲酰化等會阻斷反應,；

• 效率遞減：隨著循環(huán)次數(shù)增加,，背景噪音加劇，測序精度下降,；

• 不適用于混合樣本：多組分混雜時難以區(qū)分PTH-產(chǎn)物來源,。

應用實例

在單克隆抗體開發(fā)過程中，Edman降解常被用于：

• 驗證重組抗體的N端一致性,；

• 確認Fab段、Fc段是否表達正確,；

• 輔助質(zhì)譜結(jié)果,，增強結(jié)構(gòu)確認的可靠性。

?特別是在質(zhì)譜未能明確區(qū)分N端修飾種類時,，Edman降解可提供關鍵佐證信息,。

盡管質(zhì)譜已成為dànbáizhì測序主流，但Edman降解作為經(jīng)典化學方法,，依舊在結(jié)構(gòu)確認,、N端修飾驗證等領域扮演著bùkětìdài的角色。選擇合適的測序策略,，結(jié)合zhuānyè服務平臺,，是實現(xiàn)高質(zhì)量科研或產(chǎn)品開發(fā)的關鍵。百泰派克生物科技整合經(jīng)典Edman測序與現(xiàn)代質(zhì)譜手段,，為蛋白結(jié)構(gòu)解析提供多維解決方案,。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務,，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務,。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,，對蛋白序列進行分析,。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二,、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學,、多肽組學,、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作,。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織,、細胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析,，分析更系統(tǒng)準確。

三,、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析,，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術先進,，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術,，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細胞RNAseq,。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標簽技術與其他技術結(jié)合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細胞存活率、細胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標,。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術,，MALDI TOF,，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì,、多肽、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA,、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證,，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務,；

2.獲國家CNAS實驗室認可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學,、多肽組學,、代謝組學、生物藥物表征,、單細胞分析,、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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