人博爾納病毒（BDV）ELISA檢測(cè)試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被博爾納病毒(BDV)的抗原包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中博爾納病毒（BDV）的存在與否。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無

陰性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無

陽性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無

檢測(cè)抗原-HRP10mL5mL無

20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋

樣本-稀釋液6mL3mL無

底物A6mL3mL無

底物B6mL3mL無

終止液6mL3mL無

封板膜2張2張無

說明書1份1份無

自封袋1個(gè)1個(gè)無

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔,，陰,、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL,；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣本-稀釋液40μL；

4.  隨后陰,、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

計(jì)算和結(jié)果判定

1.  試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

注意事項(xiàng)

1.  人博爾納病毒（BDV）ELISA檢測(cè)試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完-全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可,。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。