人博爾納病毒（BDV）ELISA檢測試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被博爾納病毒(BDV)的抗原包被微孔中,，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中博爾納病毒（BDV）的存在與否,。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

陰性對照0.5mL 0.5mL 無

陽性對照0.5mL 0.5mL 無

檢測抗原-HRP10mL5mL無

20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

樣本-稀釋液6mL3mL無

底物A6mL3mL無

底物B6mL3mL無

終止液6mL3mL無

封板膜2張2張無

說明書1份1份無

自封袋1個1個無

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置陰,、陽性對照孔和樣本孔，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本-稀釋液40μL,；

4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

計算和結(jié)果判定

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

注意事項

1.  人博爾納病毒（BDV）ELISA檢測試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完-全溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本無需稀釋,，直接取50μL加樣即可,。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。